| 研究課題/領域番号 |
26282191
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| 研究機関 | 筑波大学 |
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研究代表者 |
正田 純一 筑波大学, 医学医療系, 教授 (90241827)
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| 研究分担者 |
柳川 徹 筑波大学, 医学医療系, 准教授 (10312852)
酒井 俊 筑波大学, 医学医療系, 講師 (30282362)
磯辺 智範 筑波大学, 医学医療系, 准教授 (70383643)
蕨 栄治 筑波大学, 医学医療系, 講師 (70396612)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 肥満 / 脂肪性肝炎 / 転写因子 / 酸化ストレス / インスリン抵抗性 / 遺伝子レスキューマウス |
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| 研究実績の概要 |
本年度は，昨年度に引き続き組織特異的p62, Nrf2遺伝子ノックインマウスの作製を行った．昨年度作製したキメラマウスのうち，キメラ率の高い雄を野生型C57BL/6雌と交配しF1ヘテロマウスを得た．遺伝子型の判定は，尾端組織DNAを用いたPCR産物のパターンを解析して行った．ここで得られる遺伝子改変マウス（p62KI/KIおよびNrf2KI/KI）は，第2イントロンで転写がストップするため，全身でp62あるいはNrf2の発現が欠損する．これらのマウスを，既に作製済のp62-/-、Nrf2-/-、あるいは互いに交配して，p62KI/KI:Nrf2-/-，p62-/-:Nrf2KI/KI，p62KI/KI:Nrf2KI/KIマウスを得た（現在この段階を遂行中である）．これらのマウスは，全身でp62およびNrf2遺伝子二重欠損となり，NASHを発症する．平成2８年度は，p62，Nrf2の全身二重欠損下において，組織特異的にp62，Nrf2の発現をレスキューするために，上記マウスを組織特異的にCreリコンビナーゼを発現するマウスと交配する．これにより生まれる仔は，Creが発現する組織でのみLoxPで挟まれた転写終結シグナルおよびpolyA付加シグナルが除去され，p62あるいはNrf2の発現がレスキューされる組織特異的ノックインマウスとなる．本研究では，腸管上皮，肝細胞，骨髄系細胞（クッパー細胞），脂肪細胞特異的ノックインマウスを作製するために，それぞれLyz2-Cre，Albumin-Cre，CK19-Cre，aP2-Creマウスを用いる．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本学動物資源センターにおいて，Nrf2遺伝子レスキューマウスは順調に作製されている．ただし，マウスの繁殖に時間を要する問題がある．その対処法として，繁殖ケージを増やして繁殖を行なっている．現在，匹数は増えてきており，遺伝子レスキューが出来ているマウスから実験を行う予定である．
研究成果の一部は，国際学会にて成果報告を行った．
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| 今後の研究の推進方策 |
NASH発症機序に重要な組織を追求するために，DKOマウスの任意の組織・細胞において各遺伝子をレスキューしたマウスを作製し，DKOマウスと形質を比較し，その組織・細胞とNASH発症との関係を明らかにする．一連の研究結果を踏まえて，分子学的機構を解明することにより，どの臓器でどの遺伝子がNASH発症に深く関わっているかを明確にすることができる．
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