研究課題
A.アストロサイトの誕生する神経上皮の部位・マーカー遺伝子・アストロサイトの最終的に分布する脳部位との対応地図の作成平成26年度で同定した大脳皮質・視床・視床下部・中脳／小脳のアストロサイトをマーキングできるCreマウス（Emx1-Cre, Olig3-Cre, Nkx2.1-Cre, En1-Creマウス）を、β actin: tetO-DIO-GFPマウス、Mlc1-tTAマウス（アストロサイト特異的にtTAを発現しているマウス）と交配した。交配したマウスは、当初の目的通り、大脳皮質・視床・視床下部・中脳／小脳のアストロサイト特異的にGFPを発現していることを蛍光顕微鏡で確認した。B.大脳皮質・線条体・小脳・延髄・視床下部のアストロサイトの発現遺伝子プロファイリングTRAP (translating ribosome affinity purification)法を用いて、培養やセルソーターを用いずに、脳をホモゲナイズするだけで特定部位のアストロサイトからのみmRNAを精製するためのβ actin: tetO-DIO-GFP-L10マウス（tetOプロモーター下流に蛍光タンパク質GFPとリボゾームタンパク質L10を融合したキメラcDNAを逆向きに挿入したベクター。cDNAの両端にはloxP, lox2722サイトがあり、Creにより正常向きになる）をCRISPR/Casシステムを用い作成した。目的のマウスを作成することができたが、GFP-L10の発現量が少なく、当初の目的に使用できないことがわかった。現在、β actin以外の遺伝子座にtetO-DIO-GFP-L10をノックインしたマウスを作成中である。
2: おおむね順調に進展している
当初予定した、大脳皮質・視床・視床下部・中脳／小脳のアストロサイト特異的にGFPを発現しているマウスの作成に成功した。
特定の脳部位のアストロサイト特異的にGFP-L10を十分量発現させることのできるレポーターマウスを作成する。そのために、挿入するβ actin遺伝子座の位置や遺伝子座そのものを変更して、新しいノックインマウスをCRISPR/Casシステムを用い作成する。
すべて 2015
すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件、 オープンアクセス 2件) 学会発表 (5件) (うち国際学会 1件)
Nature Commun
巻: 6 ページ: 10090
10.1038/ncomms10090.
J Neurosci
巻: 35 ページ: 12432-12445
10.1523/JNEUROSCI.3648-14.2015.
