TDP43の分子内病原配列に対する特異抗体を用いた新規分子標的治療・診断法の開発

2017 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 26290023
• 研究機関: 滋賀医科大学
• 研究代表者: 漆谷 真 滋賀医科大学, 医学部, 教授 (60332326)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: 脳神経疾患 / 蛋白質 / シグナル伝達 / 筋萎縮性側索硬化症 / TDP-43

研究実績の概要

平成29年度は前年度計画に従い以下の研究を行った。
１）病原細胞内抗体に対する自己分解型細胞内抗体の開発研究。
以前我々が作出した、ミスフォールドTDP-43を特異的に認識する3B12A マウスモノクローナル抗体のハイブリドーマよりクローニングした一本鎖抗体scFvにシャペロン介在性オートファジーシグナル(CMA)を付加させた自己分解型細胞内抗体について、in vitroでの異常凝集体除去効果と細胞死抑制効果を確認し、子宮内電気穿孔法を用いてマウス胎仔脳内に発現させたTDP-43凝集体に対しても同様の効果を認めた。これらの研究成果を国際学術誌に投稿し採択された（Tamakiら、Scientific Reports 2018）。
２）分子標的治療を検証するためのトランスジェニックマウスの作製
前年度までにhSynapsinプロモーター下に細胞質凝集型TDP-43を発現コンストラクトの導入したマウスの作製を試みたが、外来蛋白質の発現と表現系を認めたマウスは得られなかった。以前市販のマウスでTDP-43病理を再現するマウスが居ないため、あらたにニューロフィラメントHプロモーターで制御されるTet-offマウス（市販）と交配でニュ論特異的なTDP-43の発現をドキシサイクリンで制御できる、コンディショナルマウスを作出し、するためのTRE-TDP-43マウスを作出するために導入遺伝子（細胞質凝集体型、細胞質型）のコンストラクション、培養細胞を用いた発現確認とドキシサイクリンによる制御の確認を行い、B6マウス受精卵へのマイクロインジェクションを行い、各々4ラインずつF1世代を得た。今後rTA-NFHマウス（市販；購入済み）との交配を行い、表現軽々解析をすすめ、今回の細胞内抗体を検証して行く予定である。

現在までの達成度 (段落)

29年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

29年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額が生じた理由

29年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額の使用計画

29年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Elimination of TDP-43 inclusions linked to amyotrophic lateral sclerosis by a misfolding-specific intrabody with dual proteolytic signals (2018)
  • 著者名/発表者名: Tamaki Y, Shodai A, Morimura T, Hikiami R, Minamiyama S, Ayaki T, Tooyama I, Furukawa Y, Takahashi R, Urushitani M
  • 雑誌名: Sci Rep 巻: 8 ページ: 6030
  • DOI: doi:10.1038/s41598-018-24463-3
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Amyotrophic Lateral Sclerosis after Receiving the Human Papilloma Virus Vaccine: A Case Report of a 15-year-old Girl (2018)
  • 著者名/発表者名: Hikiami Ryota、Yamakado Hodaka、Tatsumi Shinsui、Ayaki Takashi、Hashi Yuichiro、Yamashita Hirofumi、Sawamoto Nobukatsu、Tsuji Teruyuki、Urushitani Makoto、Takahashi Ryosuke
  • 雑誌名: Int Med 巻: * ページ: 1～3
  • DOI: https://doi.org/10.2169/internalmedicine.0285-17
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pathological Endogenous α-Synuclein Accumulation in Oligodendrocyte Precursor Cells Potentially Induces Inclusions in Multiple System Atrophy (2018)
  • 著者名/発表者名: Kaji Seiji、Maki Takakuni、Kinoshita Hisanori、Uemura Norihito、Ayaki Takashi、Kawamoto Yasuhiro、Furuta Takahiro、Urushitani Makoto、Hasegawa Masato、Kinoshita Yusuke、Ono Yuichi、Mao Xiaobo、Quach Tran H.、Iwai Kazuhiro、Dawson Valina L.、Dawson Ted M.、Takahashi Ryosuke
  • 雑誌名: Stem Cell Rep 巻: 10 ページ: 356～365
  • DOI: https://doi.org/10.1016/j.stemcr.2017.12.001
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Multiple proteinopathies in familial ALS cases with optineurin mutation. (2017)
  • 著者名/発表者名: Ayaki T, Ito H, Komure O, Kamada M, Nakamura M, Wate R, Kusaka H, Yamaguchi Y, Li F, Kawakami H, Urushitani M, Takahashi R
  • 雑誌名: J Neuropathol Exp Neurol 巻: 77 ページ: 128～138
  • DOI: http://doi.org/10.1093/jnen%2Fnlx109
  • 査読あり
• [雑誌論文] Charcot-Marie-Tooth disease type 2A with an autosomal recessive inheritance; the first report of an adult-onset disease. (2017)
  • 著者名/発表者名: Hikiami R, Yamashita H, Koita N, Jingami N, Sawamoto N, Furukawa K, Kawai H, Terashima T, Oka N, Hashiguchi A, Takashima H, Urushitani M, and Takahashi
  • 雑誌名: J Hum Genet 巻: 63 ページ: 89～92
  • DOI: 10.1038/s10038-017-0353-3
  • 査読あり
• [学会発表] 分解型細胞内抗体を用いたALSの分子標的治療 (2017)
  • 著者名/発表者名: 漆谷 真.
  • 学会等名: 第35回日本神経治療学会総会
  • 招待講演
• [学会発表] 孤発性筋萎縮性側索硬化症における細胞内抗体を用いた異常TDP-43除去の試み (2017)
  • 著者名/発表者名: 漆谷 真.
  • 学会等名: 第29回日本神経免疫学会学術集会
  • 招待講演
• [学会発表] 病原蛋白質特異的エピトープに対するALSの分子標的治療開発戦略. (2017)
  • 著者名/発表者名: 漆谷 真.
  • 学会等名: 日本薬学会, 次世代を担う創薬・医療薬理シンポジウム2017
  • 招待講演
• [学会発表] Cilostazol reduced gliovascular damage and working memory impairment via endotelial protection in a mouse model of vascular dementia. (2017)
  • 著者名/発表者名: itamura A, Sanz Y, Duncombe J, Koudelka J, Binnie M, Lennen R, Webster S, Jansen M, Marshall I, Ogawa N, Urushitani M, Kalaria R, Ihara M, Horsburgh K.
  • 学会等名: World Congress of Neurology. 2017
  • 国際学会
• [学会発表] Myositis and muscular inclusions in Nakajo-Nishimura syndrome. (2017)
  • 著者名/発表者名: Ayaki T, Murata K, Kanazawa N, Uruha A, Nishino I, Omura K, Sugie K, Mori M, Ueno S, Furukawa F, Ito H, Urushitani M, Takahashi R
  • 学会等名: World Congress of Neurology. 2017
  • 国際学会
• [学会発表] Degradative intrabody for selective elimination of pathogenic TDP-43 aggregates in vitro and in murine embryos’ cerebrum (2017)
  • 著者名/発表者名: Tamaki Y, Shodai A, Hikiami R, Minamiyama S, Morimura T, Ayaki T, Takahashi R, Urushitani M.
  • 学会等名: World Congress of Neurology. 2017
  • 国際学会
• [学会発表] Pathological analysis of a novel conformational specific anti-SOD1 antibody using human and mice tissues in amyotrophic lateral sclerosis (2017)
  • 著者名/発表者名: Yamaguchi Y, Ayaki T, Urushitani M, Takahashi R.
  • 学会等名: World Congress of Neurology. 2017,
  • 国際学会
• [学会発表] Development of an effective technology for inductive differentiation from bone marrow-derived mononuclear cells to neuroprotective microglia. (2017)
  • 著者名/発表者名: Kobashi S, Terashima T, Nakae Y, Katagi M, Morimura T, Kojima H, Urushitani M
  • 学会等名: World Congress of Neurology. 2017,
  • 国際学会
• [図書] 脳内環境辞典 (2017)
  • 著者名/発表者名: 漆谷 真.
  • 総ページ数: 156
  • 出版者: メディカルドゥ社
  • ISBN: 978-4-944157-64-8
• [備考] 滋賀医科大学 内科学講座神経内科ホームページ 「研究について」
  • URL: http://shiga-neurology.com/research/
• [産業財産権] 異常TDP-43を分解除去する抗体断片 (2017)
  • 発明者名: 漆谷真、玉木良高
  • 権利者名: 漆谷真、玉木良高
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 特願2018-049752