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2017 年度 実績報告書

遺伝暗号改変による翻訳後修飾タンパク質の革新的生産技術開発

研究課題

研究課題/領域番号 26291035
研究機関国立研究開発法人理化学研究所

研究代表者

坂本 健作  国立研究開発法人理化学研究所, ライフサイエンス技術基盤研究センター, グループディレクター (50240685)

研究期間 (年度) 2014-04-01 – 2018-03-31
キーワード拡張遺伝暗号 / 非天然型アミノ酸 / カイコ / シルク / アジドフェニルアラニン
研究実績の概要

遺伝暗号システムの改変によって、翻訳後修飾などの化学修飾を望みの部位に導入したタンパク質を均一かつ大量に生産する技術の開発を目的として研究を進めてきた。共同研究を通じて、開発された技術を他の研究者に提供することも本研究の目標の1つであり、具体的には、寺本英敏博士(国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構)と共に、アジド基を持った非天然型アミノ酸をカイコのシルク・タンパク質に効率よく導入するための技術開発を行った。カイコ由来のフェニルアラニンtRNA合成酵素(BmPheRS)のアミノ酸結合部位に改変によってアジドフェニルアラニンの導入を目指した。報告されているヒトPheRSの結晶構造情報を元に、これまでに報告されているPheRS変異体も考慮して適切な変異部位を探索した結果、α鎖432位の変異がBmPheRSのアミノ酸特異性に影響を与えることを見出した。そこで、この部位のサチュレーション・ミュータジェネシスを実施した。アジドフェニルアラニンの導入レベルを調べるために、大腸菌のタンパク質にこの非天然型アミノ酸がランダムに導入された場合に生起する増殖阻害の程度を指標とセレクションを進め、効率よくアジドフェニルアラニンを導入する変異体PheRS(αA432)及びPheRS(αV432)を得ることができた。最後に、これらのBmPheRS変異体を絹糸腺特異的に発現するトランスジェニック・カイコを作製してシルクへの導入を確認した。変異体PheRSのアミノ酸結合部位の構造モデルを作製することで、効率的な非天然型アミノ酸の導入のメカニズムを推測した。本研究成果は、平成30年3月に論文で公表され(ACS Synthetic Biology誌)、理研と農研機構との共同プレスリリースを行った。本成果は、30年4月には米国の普及誌New Scientistsに取り上げられた。

現在までの達成度 (段落)

29年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

29年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額が生じた理由

29年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額の使用計画

29年度が最終年度であるため、記入しない。

  • 研究成果

    (1件)

すべて 2018

すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件)

  • [雑誌論文] Genetic Code Expansion of the Silkworm Bombyx mori to Functionalize Silk Fiber2018

    • 著者名/発表者名
      Teramoto H, Amano Y, Iraha F, Kojima K, Ito T, Sakamoto K
    • 雑誌名

      ACS Synthetic Biology

      巻: 7 ページ: 801-806

    • DOI

      10.1021/acssynbio.7b00437

    • 査読あり

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公開日: 2018-12-17  

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