| 研究課題/領域番号 |
26292005
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
村田 稔 岡山大学, その他部局等, 教授 (20166292)
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| 研究分担者 |
長岐 清孝 岡山大学, その他部局等, 准教授 (70305481)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 植物人工染色体 / ベクター / イネ / オオムギ / 組換え植物 |
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| 研究実績の概要 |
本研究の目的は、イネとオオムギにおいて、多くの遺伝子を含む巨大DNAの導入が可能な“植物人工染色体”を創出し、それらを広く利用できるようカスタマイズすることにある。そのため、まずイネ科植物において、人工環状染色体を創出できるコンストラクトを作成した。このコンストラクトでは、近接する２つのLoxPサイトがT-DNA（LBとRBで挟まれる領域）に組み込まれ、そのうち1つは非自律型トランスポゾンDs内に配置された。これに、プロモーター（PMAS）でドライブしたバスタ耐性遺伝子(BAR)とプロモーターをもたないハイグロマイシン耐性遺伝子(HYG)を加えた。さらに、イントロンを挿入したCreリコンビナーゼ遺伝子(CRE)を導入した。このコンストラクトを、自律型トランスポゾンAcのトランスポゼース（転移酵素）遺伝子を導入したイネに、アグロバクテリウムを介して導入し、複数の形質転換体を得た。得られた形質転換植物では、トランスポゼースの働きによりDs-LoxP-Dsカセットが他の領域に転移すると、CRE遺伝子の上流に、35Sプロモーター(P35S)が配置され、Creリコンビナーゼが発現することが想定された。発現したCreリコンビナーゼは、２つのLoxP間の組換えを特異的に触媒し、その間のDNAを環状化する。この結果、35Sプロモーターはハイグロマイシン耐性遺伝子の上流に位置することになり、ハイグロマイシン耐性が現れると考えられた。しかし、T0形質転換体においては、ハイグロマイシン遺伝子と35S プロモーターとの融合は確認されなかった。今後、これら形質転換体を育成し、次代でのハイグロマイシン耐性個体を選抜する予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
作成したコンストラクトでは、思ったほど形質転換体が作出されてこない。形質転換法などの改良等を検討している。
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| 今後の研究の推進方策 |
植物人工染色体を簡易的に作出するため、新たなコンストラクトを作成したが、効率が思ったほど上がらないため、シロイヌナズナで用いた方法も採用することとした。また、人工環状染色体への外来遺伝子の導入も検討している。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
研究を効率的に展開するため、次年度において同一人材を1ヶ月間雇用する必要があるため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
形質転換体を作成するため、人件費として使用する。
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