| 研究課題/領域番号 |
26292170
|
|---|
| 研究機関 | 高知大学 |
|---|
研究代表者 |
枝重 圭祐 高知大学, 教育研究部総合科学系, 教授 (30175228)
|
|---|
| 研究分担者 |
高橋 昌志 北海道大学, 農学研究院, 教授 (10343964)
越本 知大 宮崎大学, フロンティア科学実験総合センター, 教授 (70295210)
葛西 孫三郎 高知大学, 教育研究部総合科学系, 教授 (60152617)
松川 和嗣 高知大学, 教育研究部総合科学系, 准教授 (00532160)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
|
| キーワード | 低温傷害 / ブタ胚 / 高温傷害 / ウシ胚 / TRPチャンネル |
|---|
| 研究実績の概要 |
一部の哺乳動物の精子や卵子や初期胚は温度感受性が高く、低温や高温にさらされると容易に傷害を受けてしまう。多くの細胞には温度変化を感知する温度センサーチャンネルが発現していることが知られている。申請者らは、これまでに、低温感受性が高いブタの卵子で発現している低温感受性チャンネルが低温傷害に関与していることを明らかにした。このチャンネルの活性化が細胞内情報伝達を経て傷害を引き起こすと考えられる。そこで本研究では、ブタ初期胚の低温傷害と、暑熱によるウシ初期胚の傷害に着目し、これらの細胞の低温/高温による傷害における温度センサーチャンネルの関与およびその傷害メカニズムを明らかにすることを目的とした。
まず、ブタ初期胚における低温感受性TRPチャンネルのmRNAの発現と、ウシ初期胚における高温感受性TRPチャンネルのmRNAの発現をしらべた。ブタ初期胚では、低温を感知するTRPA1とTRPM8のmRNAが発現していることがわかった。ウシ初期胚では、高温を感知するTRPV3のmRNAが発現していることがわかった。また、ブタでは、低温感受性TRPチャンネルの1つであるTRPA1のdsRNAを前核期卵に注入して発現を抑制した２細胞期胚を作製し、その低温感受性をしらべた。TRPA1発現抑制２細胞期胚では低温傷害が大きく軽減されたことから、このチャンネルがブタ初期胚の低温傷害に直接関与していることがわかった。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
計画通り、ブタ初期胚で低温感受性TRPチャンネルのmRNAが発現し、ウシ初期胚では高温感受性TRPチャンネルのmRNAが発現していることを明らかにできた。さらに、ブタ２細胞期胚では、低温感受性TRPチャンネルの発現を抑制すると低温傷害が軽減され、このチャンネルがブタ初期胚の低温傷害に直接関与していることがわかった。しかしながら、ブタでは、精子での低温感受性TRPチャンネルのmRNAの発現については結果にばらつきが多く、発現が確認できなかった。また、ウシでは、高温感受性TRPV3のアンタゴニストのウシ初期胚の高温傷害に対する低減効果をしらべたが、効果が明確ではなかった。
|
| 今後の研究の推進方策 |
実験１．昨年度に引き続き、ブタでは、精子での低温感受性TRPチャンネルの発現について、mRNAレベルだけでなくタンパク質レベルでしらべる。またウシでは、適切な高温処理条件を検討した上で、ウシ初期胚の高温傷害に対するTRPV3のアンタゴニストの低減効果をしらべる。
実験２．低温感受性TRPチャンネルの発現を抑制したブタの卵子/初期胚の耐凍性：卵巣から回収した直後のブタ未成熟卵子にTRPA1あるいはTRPM8のdsRNAを注入して12時間培養して作製した低温感受性TRPチャンネル発現抑制成熟途上卵子を、2-step法でガラス化凍結する。融解後に成熟培養し、卵子の回収直後の形態と成熟率によって生存性を判定する。また、ブタ前核期胚に同様にdsRNA等を注入して作製した低温感受性TRPチャンネル発現抑制２細胞期胚も、卵子と同様にガラス化凍結する。融解後、回収直後の形態と胚盤胞への発育率により生存性を判定する。
|
