| 研究課題/領域番号 |
26292173
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
池田 素子 名古屋大学, 生命農学研究科, 教授 (20262892)
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| 研究分担者 |
永峰 俊弘 国立研究開発法人理化学研究所, その他部局等, 研究員 (90237553)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 抗ウイルス応答 / 核多角体病ウイルス / 昆虫培養細胞 / リボソームRNA分解 / 全タンパク質合成停止 |
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| 研究実績の概要 |
これまでに，核多角体病ウイルス（NPV）感染によって全タンパク質合成停止となるカイコ細胞で，リボソームRNA（rRNA）が分解減少することを明らかにし，全タンパク質合成停止の原因であることを示唆した．さらに，NPVのp143遺伝子によりrRNA分解が誘導されることを明らかにした．
そこで，今年度はまず，NPVのP143と相互作用するカイコ由来BM-N細胞のタンパク質を免疫沈降法により探索した．ホ乳動物細胞用のTAP System（Tandem Affinity Purification System）を昆虫細胞用に改変し，p143遺伝子を挿入することによってP143発現プラスミドを作製した．P143発現プラスミドをBM-N細胞で一過性発現させ，発現細胞から相互作用するタンパク質を免疫沈降法により精製した．SDS-PAGE法により精製された細胞タンパク質のバンドを確認することができた．
次に，rRNA分解を誘導するためのシグナル伝達因子の同定を目的として，Autographa californica MNPV（AcMNPV）あるいはカイコNPV感染細胞と偽感染細胞から経時的にRNAを回収し，次世代シーケンサーを用いたRNA-seq解析をおこなった．
さらに，全タンパク質合成停止をレスキューするカイコNPV因子の探索を目的として，AcMNPVおよびカイコNPVのそれぞれのp143遺伝子間でアミノ酸置換を行い，全タンパク質合成停止をレスキューするために必須のBm-P143のアミノ酸配列を決定した．その結果，Bm-P143のScHと呼ばれる領域がレスキューに関わること，Ac-P143のScH領域に含まれる6から8アミノ酸がrRNA分解誘導に関与することを明らかにした．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
カイコ由来の培養細胞を，当初予定していた培養細胞系から変更したため，ウイルス感染実験条件を再検討するなどに時間をとられた．そのため，感染細胞を用いたRNA-seq解析が計画よりも大幅に遅れた．
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| 今後の研究の推進方策 |
RNAseq解析以外は概ね順調に進んでいる．RNA-seq解析については，研究協力者から指導を受けながら，次年度以降データ解析を進めていく予定である．また，ゲノム機能情報がデータベース化されている培養細胞系に変更したことから，既存のデータを利用しながら遺伝子のノックダウン解析を進めることが可能となった．そのため，今後の解析は計画以上に早く進むことが期待できる．
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| 次年度使用額が生じた理由 |
RNAseq解析とデータマイニング,N末端配列解析など業者に委託する予定であったが，研究に遅れが生じ次年度以降に持ち越されたため．
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| 次年度使用額の使用計画 |
RNAseq解析とデータマイニング，N末端配列解析については，27年度に研究を計画している．
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