エンドサイトーシスと外来因子取込を制御する細胞内シグナル伝達マシナリー

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 26293041
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 大場 雄介 北海道大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (30333503)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2017-03-31
• キーワード: シグナル伝達 / エンドサイトーシス / バイオイメージング / インフルエンザウイルス

研究実績の概要

本年度は、平成26年度に質量分析法（44個）と酵母ツーハイブリッド法（6個）で同定した新規PI3K結合因子のうち、2因子について詳細な解析を行った。それぞれについてPI3Kとの結合を生化学的に確認した後、siRNAを用いたノックダウンによって機能解析を行った。その結果、ノックダウンによりRas-PI3K複合体のエンドソームへの移行が阻害され、デキストランやトランスフェリンの取込が抑制された。したがって、これら2因子は当初のねらい通りRas-PI3K複合体の動態制御とエンドサイトーシス制御の両方に関与する分子であると確認できた。
一方で、それぞれの因子が有する固有の機能についても興味深い知見が得られつつある。1つの因子については、エンドソーム以外の他の細胞内小器官に局在することが、免疫蛍光染色により明らかになった。この因子をノックダウンあるいは過剰発現することにより、オルガネラマーカーの細胞内分布に変化が生じた。この結果から、当該因子は異種オルガネラ相互作用や、オルガネラ膜の恒常性維持に関与する因子であると考えら得た。もう一つの因子は、これまである増殖因子下流で機能すると報告されているアダプター分子のファミリーである。しかし、この増殖因子下流においては、我々が同定した因子は直接的な機能を有していない。興味深いことに、他の細胞外刺激に応答して、上記増殖因子受容体の内在化を制御することを示唆するデータが得られつつある。また、当該因子のチロシン残基がSrcファミリーキナーゼによりリン酸化されることも判明した。以上よりこの因子は、Srcファミリーキナーゼを介して、異なる受容体シグナルのクロストーク、特に細胞内移行などの動態制御を介したクロストークに関与する因子であると予想される。
また、他の制御因子についての解析にも着手しており、さらに2因子についてはPI3Kとの結合を確認し、かつ細胞内局在についても解析済みである。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

申請時の調書通りの進捗であるため。

今後の研究の推進方策

上記2因子について当初の予定にある解析を進めるとともに、本年度までに見出された固有の機能に関する解析を行い、その結果を本年度中に学術雑誌に投稿する。また、他の因子についても逐次解析をすすめる。

研究成果

• [雑誌論文] Lypd8 promotes the segregation of flagellated microbiota and colonic epithelia. (2016)
  • 著者名/発表者名: R. Okumura, T. Kurakawa, T. Nakano, H. Kayama, M. Kinoshita, D. Motooka, K. Gotoh, T. Kimura, N. Kamiyama, T. Kusu, Y. Ueda, H. Wu, H. Iijima, S. Barman, H. Osawa, H. Matsuno, J. Nishimura, Y. Ohba, S. Nakamura, T. Iida, M. Yamamoto, E. Umemoto, K. Sano and K. Takeda.
  • 雑誌名: Nature 巻: 532 ページ: 117-121
  • DOI: 10.1038/nature17406
  • 査読あり
• [雑誌論文] Receptor activator of NF-κB ligand induces cell adhesion and integrin α2 expression via NF-κB in head and neck cancers. (2016)
  • 著者名/発表者名: T. Yamada, M. Tsuda, T. Wagatsuma, Y. Fujioka, M. Fujioka, A.O. Satoh, K. Horiuchi, S. Nishide, A. Nanbo, Y. Totsuka, H. Haga, S. Tanaka, M. Shindoh and Y. Ohba.
  • 雑誌名: Sci. Rep. 巻: 6 ページ: 23545
  • DOI: 10.1038/srep23545
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Attenuation of ligand-induced activation of angiotensin II type 1 receptor signaling by the type 2 receptor via protein kinase C. (2016)
  • 著者名/発表者名: T. Inuzuka, Y. Fujioka, M. Tsuda, M. Fujioka, A.O. Satoh, K. Horiuchi, S. Nishide, A. Nanbo, S. Tanaka and Y. Ohba.
  • 雑誌名: Sci. Rep. 巻: 6 ページ: 21613
  • DOI: 10.1038/srep21613
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] A role of the sphingosine-1-phosphate (S1P)-S1P receptor 2 pathway in Epithelial Defense Against Cancer (EDAC). (2016)
  • 著者名/発表者名: S. Yamamoto, Y. Yako, Y. Fujioka, M. Kajita, T. Kameyama, S. Kon, S. Ishikawa, Y. Ohba, Y. Ohno, A. Kihara and Y. Fujita.
  • 雑誌名: Mol. Biol. Cell 巻: 27 ページ: 491-499
  • DOI: 10.1091/mbc.E15-03-0161
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Tyr724 phosphorylation of ELMO1 by Src is involved in cell spreading and migration via Rac1 activation. (2015)
  • 著者名/発表者名: Y. Makino, M. Tsuda, Y. Ohba, H. Nishihara, H. Sawa, K. Nagashima and S. Tanaka.
  • 雑誌名: Cell Commun. Signal. 巻: 13 ページ: 42
  • DOI: 10.1186/s12964-015-0113-y
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Molecular role of RNF43 in canonical and noncanonical Wnt signaling. (2015)
  • 著者名/発表者名: T. Tsukiyama, A. Fukui, S. Terai, Y. Fujioka, K. Shinada, H. Takahashi, T.P. Yamaguchi, Y. Ohba and S. Hatakeyama.
  • 雑誌名: Mol. Cell. Biol. 巻: 35 ページ: 2007-2023
  • DOI: 10.1128/MCB.00159-15
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Adaptor protein CRK induces epithelial-mesenchymal transition and metastasis of bladder cancer cells through HGF/c-Met feedback loop. (2015)
  • 著者名/発表者名: R. Matsumoto, M. Tsuda, L. Wang, N. Maishi, T. Abe, T. Kimura, M. Tanino, H. Nishihara, K. Hida, Y. Ohba, N. Shinohara, K. Nonomura and S. Tanaka.
  • 雑誌名: Cancer Sci. 巻: 106 ページ: 709-17
  • DOI: 10.1111/cas.12662
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Fluorescent protein-based biosensors to visualize signal transduction beneath the plasma membrane. (2015)
  • 著者名/発表者名: Y. Fujioka, A. Nanbo, S.Y. Nishide and Y. Ohba.
  • 雑誌名: Anal. Sci. 巻: 31 ページ: 267-274
  • DOI: 10.2116/analsci.31.267
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [学会発表] Ras-PI3K シグナルを介したエンドサイトーシス制御におけるミトコンドリア外膜タンパク質の関与 (2016)
  • 著者名/発表者名: 佐藤絢、藤岡容一朗、堀内浩水、ネパールプラバ、西出真也、南保明日香、大場雄介
  • 学会等名: 第93回日本生理学会大会
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター（北海道・札幌市）
  • 年月日: 2016-03-22 – 2016-03-24
• [学会発表] Ras-PI3K シグナルを介したエンドサイトーシスの制御に関与する分子の機能解析 (2016)
  • 著者名/発表者名: 堀内浩水、藤岡容一朗、南保明日香、佐藤絢、西出真也、小布施力史、大場雄介
  • 学会等名: 第93回日本生理学会大会
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター（北海道・札幌市）
  • 年月日: 2016-03-22 – 2016-03-24
• [学会発表] RANKL は NF-κBの活性化を介してインテグリンα2の発現と細胞接着を亢進する (2016)
  • 著者名/発表者名: 大場雄介、藤岡容一朗、佐藤絢、堀内浩水、西出真也、南保明日香
  • 学会等名: 第93回日本生理学会大会
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター（北海道・札幌市）
  • 年月日: 2016-03-22 – 2016-03-24
• [学会発表] 時計タンパク質BMAL1および CLOCK の細胞内局在 (2016)
  • 著者名/発表者名: 西出真也、藤岡容一朗、南保明日香、大場雄介
  • 学会等名: 第93回日本生理学会大会
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター（北海道・札幌市）
  • 年月日: 2016-03-22 – 2016-03-24
• [学会発表] PKC を介したアンジオテンシン 2 型受容体による 1 型受容体シグナルの減弱 (2016)
  • 著者名/発表者名: 藤岡容一朗、犬塚貴之、津田真寿美、藤岡真理、佐藤絢、堀内浩水、西出真也、南保明日香、田中伸哉
  • 学会等名: 第93回日本生理学会大会
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター（北海道・札幌市）
  • 年月日: 2016-03-22 – 2016-03-24
• [学会発表] インフルエンザウイルス粒子の取り込みと感染を制御するシグナル伝達ネットワーク (2016)
  • 著者名/発表者名: 大場雄介、藤岡容一朗、田端和仁、西出真也、南保明日香、野地博行
  • 学会等名: 新学術領域「少数性生物学」研究成果報告会
  • 発表場所: 東京大学伊藤国際学術研究センター伊藤謝恩ホール（東京都・文京区）
  • 年月日: 2016-03-15 – 2016-03-15
  • 招待講演
• [学会発表] カルシウムチャネルを介したインフルエンザウイルス宿主細胞侵入機構の解明 (2016)
  • 著者名/発表者名: 藤岡容一朗、南保明日香、西出真也、大場雄介
  • 学会等名: 新学術領域「少数性生物学」研究成果報告会
  • 発表場所: 東京大学伊藤国際学術研究センター伊藤謝恩ホール（東京都・文京区）
  • 年月日: 2016-03-15 – 2016-03-15
• [学会発表] The mechanism of influenza virus entry into host cells via calcium signaling-mediated endocytosis. (2015)
  • 著者名/発表者名: Yoichiro Fujioka, Asuka Nanbo, Shin-ya Nishide and Yusuke Ohba.
  • 学会等名: The 2015 International Chemical Congress of Pacific Basin Societies (Pacifichem)
  • 発表場所: ハワイコンベンションセンター他（米国ハワイ州・ホノルル市 ）
  • 年月日: 2015-12-15 – 2015-12-20
  • 国際学会
• [学会発表] 蛍光バイオイメージングによるシグナル伝達と細胞機能の評価 (2015)
  • 著者名/発表者名: 大場雄介
  • 学会等名: CVMW2015心血管代謝週間
  • 発表場所: 神戸国際会議場（兵庫県・神戸市）
  • 年月日: 2015-12-10 – 2015-12-12
  • 招待講演
• [学会発表] 蛍光バイオセンサーを用いた臨床診断技術開発とその応用 (2015)
  • 著者名/発表者名: 大場雄介
  • 学会等名: BMB2015（第38回日本分子生物学会年会、第88回日本生化学会大会合同大会）
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド（兵庫県・神戸市）
  • 年月日: 2015-12-01 – 2015-12-04
  • 招待講演
• [学会発表] Ras-PI3Kシグナルによるエンドサイトーシス制御機構におけるミトコンドリアポアタンパク質の関与 (2015)
  • 著者名/発表者名: 佐藤絢、藤岡容一朗、堀内浩水、ネパールプラバ、西出真也、南保明日香、大場雄介
  • 学会等名: BMB2015（第38回日本分子生物学会年会、第88回日本生化学会大会合同大会）
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド（兵庫県・神戸市）
  • 年月日: 2015-12-01 – 2015-12-04
• [学会発表] Ras-PI3Kの時空間制御を介したエンドサイトーシス調節因子の機能解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 堀内 浩水、藤岡容一朗、佐藤絢、ネパールプラバ、西出真也、南保明日香、小布施力史、大場 雄介
  • 学会等名: BMB2015（第38回日本分子生物学会年会、第88回日本生化学会大会合同大会）
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド（兵庫県・神戸市）
  • 年月日: 2015-12-01 – 2015-12-04
• [学会発表] インフルエンザウイルス感染と宿主細胞侵入時に惹起される細胞内シグナルの可視化 (2015)
  • 著者名/発表者名: 大場雄介、藤岡容一朗、田端和仁、西出真也、南保明日香、野地博行
  • 学会等名: 第53回日本生物物理学会年会
  • 発表場所: 金沢大学角間キャンパス自然科学本館（石川県・金沢市）
  • 年月日: 2015-09-13 – 2015-09-15
  • 招待講演
• [学会発表] シグナル伝達のバイオイメージングと臨床応用 (2015)
  • 著者名/発表者名: 大場雄介
  • 学会等名: 第57回歯科基礎医学会学術大会
  • 発表場所: 朱鷺メッセ新潟コンベンションセンター（新潟県・新潟市）
  • 年月日: 2015-09-11 – 2015-09-13
  • 招待講演
• [学会発表] インフルエンザウイルス宿主細胞侵入におけるカルシウム動態の解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 藤岡容一朗、南保明日香、西出真也、大場雄介
  • 学会等名: 第67回日本細胞生物学会
  • 発表場所: タワーホール船堀（東京都・江戸川区）
  • 年月日: 2015-06-30 – 2015-07-02
• [学会発表] A Signalling Network Critical for Influenza Virus Entry and Infection. (2015)
  • 著者名/発表者名: Yusuke Ohba and Yoichiro Fujioka.
  • 学会等名: 第１回感染症イメージングシンポジウム
  • 発表場所: 長崎大学グローバル研究棟（長崎県・長崎市）
  • 年月日: 2015-06-04 – 2015-06-04
  • 招待講演
• [図書] 新臨床腫瘍学[第4版] （シグナル伝達系） (2015)
  • 著者名/発表者名: 大場雄介
  • 総ページ数: 738 (14-22)
  • 出版者: 南江堂（日本臨床腫瘍学会編）