難治性疾患に対するmiRNA補充療法の開発

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 26293088
• 研究機関: 東京医科大学
• 研究代表者: 黒田 雅彦 東京医科大学, 医学部, 教授 (80251304)
• 研究分担者: 村上 善基 大阪市立大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (00397556) ; 須藤 カツ子 東京医科大学, 医学部, 兼任講師 (50126091)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2017-03-31
• キーワード: miRNA / miR34 / miR29 / Dicer / 肺腺癌 / IPF

研究実績の概要

項目1 Dicer活性の低いがん細胞でも効果を発揮する補充型miRNAプラトフォームの開発:一般的にがん細胞は、Dicerの活性が低いため、miRNAの発現量が低下していると考えられている。従ってmiRNAの補充療法を考えた際は、Dicer非依存的なmiRNAのAgo2の取り込みが重要と考える（Nature 425:584,2010, Science 328:1694,2010）。このような背景の中、今年度は、特殊な構造をとるmiRNAの開発に成功しghRNAと命名した。また、Dicer -/-細胞の作製にも成功し、ghRNAがDicer非依存的に作用することが明らかになった。
項目2 疾患細胞特異的に発現する分子を同定し、それに結合可能なペプチドを単離:今年度は、EGFRに結合するペプチドの単離を行った。
項目3 エクソソーム成分に類似した脂質をコンジュゲートしたmiRNAの開発:
エクソソームは、RNaseに抵抗性で、生理的に存在する生体内成分であることから、理想的なmiRNA/siRNAのドラッグデリバリーシステムと考えられるが、一方で生体成分であるがゆえにMHCクラスI,IIの発現があり、生物製剤として免疫拒絶の問題がある。したがって、エクソソームに類似した人工的物質を作ることが理想的である。今年度は、BONAC社の協力を得てエクソソームと同サイズの粒子を作製することに成功した。
項目4 特発性肺線維症(IPF)及び肺がんに対するmiRNA補充療法の非臨床開発:今年度は、まず活性化Rasによる肺腺癌モデルでの検討を行った。DDSとしてはキトサンを用い、標的miRNAにはmiR-34aを用いて検討を開始している。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

研究項目1～4においていずれも計画に沿って進展している。

今後の研究の推進方策

我々が目指すのは、早期の臨床応用である。そのためには、研究項目１～４ のすべてが必要である。特に項目１のmiRNAプラットフォームはほぼ完成形になっている。そこで、今後はこのmiRNAを、どのように病変部に送達していくのかがポイントになる。研究計画にも記載したが、そのためには、エクソソームを用いること、やペプチドを使い臓器特異性を付加すること、を考慮している。一方で、これ以外にLNPの技術を用いることも、研究の進展によっては考慮していく。また、将来の薬品化のことも考慮し、個々の技術の特許化も行っていく。

次年度使用額が生じた理由

未使用の端数額を繰り越ししたため。

次年度使用額の使用計画

27年度の消耗品とし合算して使用する。

研究成果

• [雑誌論文] Ovarian small cell carcinoma of pulmonary type appearing in ante mortem ascites: An aoutopsy case and review of the literature. (2015)
  • 著者名/発表者名: Hashimoto H, Kurata A, Fujita K, Shimada H, Nagai T, Horiguchi H, Kuroda M.
  • 雑誌名: Human Pathology 巻: in press ページ: in press
  • DOI: doi: 10.1016/j.ehpc.2015.02.003.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Angiopoietin-like 7 is an anti-angiogenic protein required to prevent vascularization of the cornea. (2015)
  • 著者名/発表者名: Toyono T, Usui T, Yokoo S, Taketani Y, Nakagawa S, Kuroda M, Yamagami S, Amano S.
  • 雑誌名: PLoS One. 巻: 26 ページ: e0116838
  • DOI: doi: 10.1371/journal.pone.0116838. eCollection 2015.
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Immaturity of mooth muscle cells in the neointima is associated with acute coronary syndrome. (2015)
  • 著者名/発表者名: Horita A, Kurata A, Ohno S, Shimoyamada H, Saito I, Kamma H, Kuroda M.
  • 雑誌名: Cardiovasc Pathology 巻: 24 ページ: 26-32
  • DOI: doi:10.1016/j.carpath.2014.09.003
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Evaluation of the Human Papillomavirus mRNA Test for the detection of cervical lesions in Japan. (2015)
  • 著者名/発表者名: Nakayama Y, Yamada M, Kurata A, Kiseki H, Kuroda M.
  • 雑誌名: Eur J Gynaec Oncol 巻: in press ページ: in press
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Inhibition of choroidal fibrovascular membrane formation by new class of RNA interference therapeutic agent targeting periostin. (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakama T, Yoshida S, Ishikawa K, Kobayashi Y, Zhou Y, Nakao S, Sassa Y, Oshima Y, Takao K, Shimahara A, Yoshikawa K, Hamasaki T, Ohgi T, Hayashi H, Matsuda A, Kudo A, Nozaki M, Ogura Y, Kuroda M and Ishibashi T.
  • 雑誌名: Gene Therapy 巻: 22 ページ: 123-137
  • DOI: doi: 10.1038/gt.2014.112.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Unique expression pattern of viral proteins in human herpesvirus 8-positive plasmablastic lymphoma: a case report. (2014)
  • 著者名/発表者名: Yamada M, Katano H, Yotsumoto M, Hashimoto H, Muramatsu T, Shiotsuka M, Fukutake K, Kuroda M.
  • 雑誌名: Int J Clin Exp Pathol 巻: 15 ページ: 6415-6418
  • DOI: eCollection 2014.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] In vivo challenging of polymyxins and levofloxacin eye drop against multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa keratitis. (2014)
  • 著者名/発表者名: Tajima K, Miyake T, Koike N, Hattori T, Kumakura S, Yamaguchi T, Matsumoto T, Fujita K, Kuroda M, Ito N, Goto H.
  • 雑誌名: J Infect Chemother. 巻: 20 ページ: 343-349
  • DOI: doi: 10.1016/j.jiac.2013.10.015.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Multifocal Kaposiform Hemangioendothelioma in Multiple Visceral Organs: An Autopsy of 9-Day-Old Female Baby. (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakaya T, Morita K, Kurata A,Ushiku T, Igarashi T, Kuroda M, Fukayama M.
  • 雑誌名: Human Pathology 巻: 45 ページ: 1773-1777
  • DOI: doi: 10.1016/j.humpath.2014.03.019.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] KLF5 regulates the integrity and oncogenicity of intestinal stem cells. (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakaya T, Ogawa S, Manabe I, Tanaka M, Sanada M, Sato T, Taketo MM, Nakao K, Clevers H, Fukayama M, Kuroda M, Nagai R.
  • 雑誌名: Cancer Research 巻: 74 ページ: 2882-2891
  • DOI: doi: 10.1158/0008-5472.CAN-13-2574.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Young-age-onset pancreatoduodenal carcinoma in Shwachman-Diamond syndrome. (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakaya T, Kurata A, Hashimoto H, Nishimata S, Kashiwagi Y, Fujita K, Kawashima H, Kuroda M.
  • 雑誌名: Pathol Int 巻: 64 ページ: 75-80
  • DOI: doi: 10.1111/pin.12133.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [学会発表] 浸潤性乳癌に出現するlet-7d発現細胞の検討． (2015)
  • 著者名/発表者名: 藤田浩司、山田正俊、高梨正勝、黒田雅彦．
  • 学会等名: 第104回日本病理学会総会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2015-04-30 – 2015-05-02
• [学会発表] 肺線維症に対するmiR-29b 補充療法． (2015)
  • 著者名/発表者名: 山田侑子、高梨正勝、須藤カツ子、上田しのぶ、黒田雅彦．
  • 学会等名: 第104回日本病理学会総会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2015-04-30 – 2015-05-02
• [学会発表] 胃癌細胞株の形態変化における、上皮間葉系移行に関わるマイクロRNA200cとその標的の検出． (2015)
  • 著者名/発表者名: 倉田 厚、山田正俊、大野慎一郎、橋本浩次、藤田浩司、高梨正勝、黒田雅彦．
  • 学会等名: 第104回日本病理学会総会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2015-04-30 – 2015-05-02
• [学会発表] 肺がん治療を想定した副作用の少ない短鎖型新規核酸医薬の開発. (2015)
  • 著者名/発表者名: 大野慎一郎、板野華蓮、原田裕一郎、浅田浩太朗、老川桂生、柏迫幹絵、高梨正勝、須藤カツ子、池田徳彦、黒田雅彦.
  • 学会等名: 第104回日本病理学会総会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2015-04-30 – 2015-05-02
• [学会発表] 肺がんにおけるArgonauteファミリーの発現・機能解析． (2015)
  • 著者名/発表者名: 浅田浩太朗、老川桂生、大野慎一郎、黒田雅彦．
  • 学会等名: 第104回日本病理学会総会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2015-04-30 – 2015-05-02
• [学会発表] microRNA 生成経路を欠損する肺がん細胞株の解析． (2015)
  • 著者名/発表者名: 老川桂生、浅田浩太朗、大野慎一郎、黒田雅彦．
  • 学会等名: 第104回日本病理学会総会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2015-04-30 – 2015-05-02
• [学会発表] Development of novel form of mimic microRNA for lung cancer therapy. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ohno S, Itano K, Harada Y, Asada K, Oikawa K, Kashiwazako M, Takanashi M, Sudo K, Ikeda N, Kuroda M.
  • 学会等名: AACR Annual Meeting 2015
  • 発表場所: Philadelphia, Pennsylvania, USA
  • 年月日: 2015-04-18 – 2015-04-22
• [学会発表] The development of short form of mimic microRNA for lung cancer therapy. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kuroda M
  • 学会等名: 26th EORTC-NCI-ACR Symposium
  • 発表場所: Barcelona, SPAIN
  • 年月日: 2014-11-18 – 2014-11-21
• [学会発表] Distinct Phosphorylation Status of TGF-β Recepyor-regulated Smads in NSCLCs with EGFR/Ras Mutations. (2014)
  • 著者名/発表者名: 牧野洋二郎、尹 晶煥、真村瑞子、黒田雅彦、池田徳彦.
  • 学会等名: 第55回日本肺癌学会学術集会
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2014-11-14 – 2014-11-16
• [学会発表] 肺がんを効果的に抑制するMimicmicroRNAの新規形状の探索. (2014)
  • 著者名/発表者名: 大野慎一郎、板野華蓮、原田裕一郎、高梨正勝、須藤カツ子、池田徳彦、黒田雅彦.
  • 学会等名: 第73回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2014-09-25 – 2014-09-27
• [学会発表] 核酸医薬品の新展開 Significance and applications of novel class of RNA for cabcer therapy. (2014)
  • 著者名/発表者名: 黒田雅彦
  • 学会等名: 第32回日本ヒト細胞学会学術集会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2014-08-30 – 2014-08-31
  • 招待講演
• [学会発表] エクソソームによるドラッグデリバリーシステムの応用 Application of drug delivery systems by exosomes (2014)
  • 著者名/発表者名: 黒田雅彦、高梨正勝、大野慎一郎.
  • 学会等名: 第6回日本RNAi研究会(JARI)、第1回日本細胞外小胞学会(JSEV)
  • 発表場所: 広島
  • 年月日: 2014-08-28 – 2014-08-30
• [学会発表] がんを効果的に抑制する短縮型Mimic microRNA の開発. (2014)
  • 著者名/発表者名: 大野慎一郎、板野華蓮、原田裕一郎、高梨正勝、須藤カツ子、黒田雅彦
  • 学会等名: 第33回分子病理学研究会~宮城蔵王シンポジウム~
  • 発表場所: 宮城
  • 年月日: 2014-07-25 – 2014-07-26
• [学会発表] Colon cancer stem cells and microRNA signature during cokon cancer development. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kuroda M.
  • 学会等名: 2nd International Symposium 2014.
  • 発表場所: Seoul, KOREA
  • 年月日: 2014-07-07 – 2014-07-07
  • 招待講演
• [学会発表] 胃癌細胞株における上皮間葉移行に関与するマイクロRNA200cとその標的の検出 (2014)
  • 著者名/発表者名: 倉田 厚、山田 正俊、橋本 浩次、藤田 浩司、大野 慎一郎、高梨 正勝、黒田 雅彦.
  • 学会等名: 第103回日本病理学会総会
  • 発表場所: 広島
  • 年月日: 2014-04-24 – 2014-04-26
• [学会発表] 自己由細胞由来のエクソソームによるドラッグデリバリーシステムへの応用. (2014)
  • 著者名/発表者名: 高梨 正勝、上田 しのぶ、須藤 カツ子、石川 章夫、黒田 雅彦.
  • 学会等名: 第103回日本病理学会総会
  • 発表場所: 広島
  • 年月日: 2014-04-24 – 2014-04-26
• [学会発表] Novel RNAi agent can control HCV replication. (2014)
  • 著者名/発表者名: Murakami Y, Ohno S, Kuroda M
  • 学会等名: AACR Annual Meeting 2014
  • 発表場所: San Diego, CA, USA
  • 年月日: 2014-04-05 – 2014-04-09