ヘリコバクター属感染と膵がん・胆道がんのリスク

2014 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 26293145
• 研究機関: 愛知医科大学
• 研究代表者: 菊地 正悟 愛知医科大学, 医学部, 教授 (40224901)
• 研究分担者: 神谷 茂 杏林大学, 医学部, 教授 (10177587) ; 上野 誠 地方独立行政法人神奈川県立病院機構神奈川県立がんセンター(臨床研究所), その他部局等, その他 (10520760) ; 森 満 札幌医科大学, 医学部, 教授 (50175634) ; 福田 能啓 兵庫医科大学, 医学部, 教授 (60148640) ; 中尾 春壽 愛知医科大学, 医学部, 教授 (60326139) ; 石井 浩 公益財団法人がん研究会, その他部局等, その他 (70521855) ; 来間 佐和子 東京都立駒込病院(臨床研究室), その他部局等, その他 (90627639)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2017-03-31
• キーワード: Helicobacter pylori / H. hepaticus / H. bilis / 菌株の大量培養 / 菌体抗原の精製 / 種特異プライマー / PCR

研究実績の概要

検体収集については、札幌医科大学、都立駒込病院で、倫理審査等の手続きを終え、再開した。他の施設でも収集を継続した。その結果、総計で膵がん症例が836例、胆道がん症例が379例からリンパ球由来DNA、血漿が収集された。これに見合う対照からも検体が収集され、それぞれ-30℃、-80℃で凍結保存されている。また、全対象から生活習慣情報を自記式質問票によって収集し、膵がん、胆道がん患者からは臨床情報も得ている。胆汁と血清のペアの収集については、倫理委員会での承認に各施設で時間がかかったことから、実質的にはH27年度初めからの開始となっている。
Helicobacter hepaticus（ATCC51449株）およびH. bilis（ATCC51630株）の標準株の培養方法を検討したが、ともにCO2 10％、O2 5%に微量の水素を加えることで良好な発育を示した。また、液体培養に5％羊血液添加ブルセラ寒天培地上にブルセラ培地を重層した2相培地を用いることで、良好な発育を認めた。菌株の大量培養法はほぼ確立され、全菌体抗原を集め、－80℃にて保存した。H. hepaticus感染スナネズミから血清抗体を採取し、H. hepaticus超音波破砕可溶性抗原を用いたELISA法の結果、抗体価の上昇が認められた (OD450=1.0以上) 。しかし、H. pyloriを菌体抗原とするELISAにおいても同様に陰性コントロールと比べて高い抗体価が観察されたため、種特異的な菌体抗原を精製する必要性が示された。本研究のために16SrRNAをターゲットとするHeliocbacter属菌ユニバーサルプライマーおよびH. hepaticusまたは H. bilis種特異的プライマーを設計し作成した。上述の標準菌株DNAを用いたPCRで良好な結果を得た。
これらにより、研究計画を達成できる見込みとなった。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

胆汁と血清のペアの収集がやや遅れている。また、膵がん、胆道がん症例の収集も当初計画よりやや少なかった。これは、倫理審査に予想以上に時間を要したことと、担当者の交代があったことによる。

今後の研究の推進方策

膵がん症例、胆道がん症例、対照からリンパ球由来DNA、血漿の収集を続ける。胆汁と血清のペアの収集は、軌道に乗ったので、今年度の早い時期に目標の100ペアの収集が終了できる見込みである。
－80℃にて保存した、H. hepaticusと H. bilisの菌体から抗原を抽出する。H. hepaticus感染スナネズミの血清を用いて、免疫ブロット法を実施して、抗体が産生されている抗原を検出する。H. bilis感染スナネズミを作成し、同様の方法で抗体が産生されている抗原を検出する。血清中のH. hepaticusと H. bilis抗体の検出方法を確立する。また、胆汁中のH. hepaticusと H. bilis由来DNAをPCRで測定し、血清抗体測定との整合性を検討する。

次年度使用額が生じた理由

胆汁と血清のペアの収集が遅れているためと、膵がん、胆道がん患者と対照からのDNA、血漿の収集が当初計画より少なかったためである。その処理、分析の費用が翌年度支出となった。これは、倫理委員会の承認の遅れ、担当者の交代の影響を受けたためである。

次年度使用額の使用計画

胆汁と血清のペアについては、27年度に予定の100人から収集して分析する。DNA,血漿についても、収集している各施設で軌道に乗ったため、当初目標をなんとか達成できる見込みである。

研究成果

• [雑誌論文] Case-control study of diabetes-related genetic variants and pancreatic cancer risk in Japan. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kuruma S, Egawa N, (18名) ,Kikuchi S, Lin Y.
  • 雑誌名: World J Gastroenterol. 巻: 20 ページ: 17456-62
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Lack of associations between genetic polymorphisms in GSTM1, GSTT1 and GSTP1 and pancreatic cancer risk: a multi-institutional case-control study in Japan. (2014)
  • 著者名/発表者名: Yamada I, Matsuyama M, Ozaka M, Inoue D, Muramatsu Y, Ishii H, Junko U, Ueno M, Egawa N, Nakao H, Mori M, Matsuo K, Nishiyama T, Ohkawa S, Hosono S, Wakai K, Nakamura K, Tamakoshi A, Kuruma S, Nojima M, Takahashi M, Shimada K, Yagyu K, Kikuchi S, Lin Y.
  • 雑誌名: Asian Pac J Cancer Prev. 巻: 15 ページ: 391-5.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] 生活習慣病と消化器疾患・病態生理学の新たな展開 肥満、糖尿病関連遺伝子多型と膵癌についての多施設共同研究 (2014)
  • 著者名/発表者名: 来間 佐和子, 江川 直人, 菊地 正悟
  • 学会等名: 日本消化器病学会
  • 発表場所: 東京国際フォーラム
  • 年月日: 2014-04-23 – 2014-04-26