研究課題
1.生体におけるmiR-33aおよび33b個別の役割の解明：a)栄養状態の変化による脂質恒常性に対する検討：miR-33aおよびmiR-33bの有無による4系統のマウスを確立し、血中脂質の変化を確認した。両者を持つマウスは最も血中HDL-Cが低く、両欠損マウスが最も高値となった。現在動脈硬化症に対する影響を確認すべく、動脈硬化モデルマウスとの交配および骨髄移植実験を行っている。b)骨髄機能の検討：miR-33欠損マウスの骨髄においては造血幹細胞含有分画であるLin(-),Sca1(+), c-Kit(+)(LSK)細胞および単球・顆粒球系前駆細胞の増加が認められた。またこれはLSK細胞のアポトーシス低下が原因であった。一方、末梢血でのLy6Chigh単球が減少していたが、その原因が、HDL-Cによる単球でのCCR2発現の低下であることを示した。従って、miR-33欠損マウスでの動脈硬化の改善作用は、HDL-C自身、HDL-Cによる単球の遊走低下、ABCA1上昇による単球マクロファージ系細胞における脂質の蓄積の低下の3点があることが明らかとなった。2.臓器別のmiR-33の役割の解明：miR-33欠損マウスにおいて大動脈圧負荷モデルを作成すると、心臓の線維化が低下したが、これはABCA1上昇を介して線維芽細胞のラフトの組成が変化し、刺激に対する増殖が低下していることを示した。また、線維芽細胞特異的miR-33欠損マウスを用いた実験においても同様の結果を得た。さらにmiR-33afloxマウスを用いて、臓器ごとの検討を続ける。3.正常肝臓、NASH肝臓サンプルを用いたmiR-33のガイド鎖、パッセンジャー鎖の解析：RNAオリゴヌクレオチドを用いて定量用の検量線を作成し、正常肝臓においてそれぞれの量を測定した。さらに疾患患者での測定を追加し、病態での作用を明らかにする。
1: 当初の計画以上に進展している
予定していた項目については全て順調にデータを得ることができた。1.a)ではさらに褐色脂肪組織におけるmiR-33a/bの役割も明らかとなってきたために、詳細な検討を続けている。2.においても心臓の線維化から、全身の線維化への影響を調べる実験へと進展している。1.生体におけるmiR-33aおよび33b個別の役割の解明：a)栄養状態の変化による脂質恒常性に対する検討：miR-33aおよびmiR-33bの有無による4系統のマウスを確立し、血中脂質の変化を確認した。現在動脈硬化症に対する影響を確認すべく、動脈硬化モデルマウスとの交配および骨髄移植実験を行っている。さらにmiR-33a/bが褐色脂肪細胞自身、交感神経活性への関与を介して、全身の代謝に影響をおよぼしていることが明らかとなった。臓器特異的遺伝子改変マウス、ウイルスによる局所遺伝子導入を介して詳細な検討を続けている。b)骨髄機能の検討：miR-33欠損マウスの骨髄機能を検討し、miR-33欠損マウスでの動脈硬化の改善作用は、HDL-C自身、HDL-Cによる単球の遊走低下、ABCA1上昇による単球マクロファージ系細胞における脂質の蓄積の低下の3点があることが明らかとなった。2.臓器別のmiR-33の役割の解明：miR-33欠損マウスにおいて大動脈圧負荷モデルを作成すると、心臓の線維化が低下した。また、線維芽細胞特異的miR-33欠損マウスを用いた実験においても同様の結果を得ることができ、全身の線維化における検討も開始した。さらにmiR-33afloxマウスを用いて、臓器ごとのmiR-33a/bの働きも検討中である。3.正常肝臓、NASH肝臓サンプルを用いたmiR-33のガイド鎖、パッセンジャー鎖の解析：疾患患者での測定を追加し、病態での作用を明らかにする予定である。
1.生体におけるmiR-33aおよび33b個別の役割の解明：a)栄養状態の変化による脂質恒常性に対する検討：miR-33aおよびmiR-33bの有無による4系統のマウスを確立し、血中脂質の変化を確認した。現在動脈硬化症に対する影響を確認すべく、動脈硬化モデルマウスとの交配および骨髄移植実験を行っている。さらにmiR-33a/bが褐色脂肪細胞自身、交感神経活性への関与を介して、全身の代謝に影響をおよぼしていることが明らかとなった。臓器特異的遺伝子改変マウス（交感神経、脂肪組織）、ウイルスによる局所遺伝子導入を介して詳細な検討を続けている。また、糖・脂質の器質の流れについても特に肝臓を中心にメタボローム解析を行い、詳細に検討する。2.臓器別のmiR-33の役割の解明：miR-33欠損マウスにおいて大動脈圧負荷モデルを作成すると、心臓の線維化が低下した。また、線維芽細胞特異的miR-33欠損マウスを用いた実験においても同様の結果を得ることができ、全身の線維化における検討を続ける。さらにmiR-33afloxマウスを用いて、臓器ごとのmiR-33a/bの働きも明らかとする予定である。3.miR-33a/33bの無いiPS細胞の作成及びその解析：ヒトにおけるmiR-33a/33bの役割を明らかにするために、これらの無いiPS細胞を作成し、未分化状態および分化状態（肝臓、神経）での影響を解析し、ヒト生体における役割の解明に向けた研究を展開する。4.miR-33a/33bを個別に制御できる核酸製剤の作成：miR-33a/33bは3塩基の違いしかなく、これまでそれぞれを個別に制御することは不可能であった。我々はRNA同士の結合が高い合成RNAを用いてそれぞれに特異的な合成核酸を設計することができた。さらに生体での効果を検討していく。
基金助成金のため。
最終年度分と併せて使用予定。
すべて 2016 2015 その他
すべて 国際共同研究 (1件) 雑誌論文 (11件) (うち査読あり 7件、 オープンアクセス 6件、 謝辞記載あり 11件) 学会発表 (17件) (うち国際学会 4件、 招待講演 3件) 図書 (1件) 備考 (1件)
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