革新的細胞チップ技術を用いた感染症に対する個の免疫医療の創成

2016 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 26293237
• 研究機関: 富山大学
• 研究代表者: 村口 篤 富山大学, 大学院医学薬学研究部(医学), 教授 (20174287)
• 研究分担者: 岸 裕幸 富山大学, 大学院医学薬学研究部(医学), 准教授 (60186210) ; 小澤 龍彦 富山大学, 大学院医学薬学研究部(医学), 助教 (10432105) ; 浜名 洋 富山大学, 大学院医学薬学研究部(医学), 助教 (90551549)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2017-03-31
• キーワード: リンパ球チップ / Tリンパ球 / T細胞受容体 / 免疫治療 / 個の免疫

研究実績の概要

平成28年度の研究実績の概要は以下のとおりである。
１）TCRは抗体と同様にMHC/ペプチドの形で抗原（ペプチド）に特異的に反応するが、抗体と異なり膜型蛋白であるために、T細胞に発現させる形でしか扱うことができない。それを可溶化型にすることでモノクローナル抗体と同様に、病変部位の検出やがん治療に応用できる可能性がある。しかし、可溶性型TCRを作成する場合、TCRベクターを大腸菌で発現させると構造が不安定になることが指摘されている。
そこで、2種類のsTCR（V領域とC領域を含む２量体）とscFv-TCR（単鎖可変領域からなる1量体）のTCR遺伝子を構築した。この遺伝子をCHO細胞に発現させ、安定化した可溶化TCRを得ることができた。さらに、可溶性TCRを、ビオチンを用いてマルチマー化（4量化）することで、より安定した高親和性の可溶化TCRを得ることができた。
２）日本脳炎ウイルス(JEV)に近縁のウエストナイルウイルス(WNV)は、高齢者層を中心に致死性の脳炎・髄膜炎を惹き起こす蚊媒介性のヒト感染性ウイルスであり、本邦にも普遍的に存在する自然宿主（鳥・蚊）と国際間の交通事情によりウイルス侵入の危険は常在しており、また今後の高齢化を鑑みれば、その感染症対策は急務である。これまでに、日本脳炎ワクチン接種によって獲得されるウエストナイルウイルスに対する交差中和抗体ができる可能性が示唆されている。そこで、本研究では、日本脳炎ワクチン接種後約１ヶ月後の血液から、ヒト抗ウエストナイルウイルスモノクローナル抗体およびウイルス特異的TCRを4個樹立した。これらの抗体のウエストナイルウイルス感染に対する予防・治療効果を、マウスを使った動物実験で確認した。

現在までの達成度 (段落)

28年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

28年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額が生じた理由

28年度が最終年度であるため、記入しない。

次年度使用額の使用計画

28年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Association Between High-Avidity T-Cell Receptors, Induced by α-Fetoprotein-Derived Peptides, and Anti-Tumor Effects in Patients With Hepatocellular Carcinoma. (2017)
  • 著者名/発表者名: Nakagawa H, Mizukoshi E, Kobayashi E, Tamai T, Hamana H, Ozawa T, Kishi H, Kitahara M, Yamashita T, Arai K, Terashima T, Iida N, Fushimi K, Muraguchi A, Kaneko S.
  • 雑誌名: Gastroenterology 巻: 152 ページ: 1395-1406
  • DOI: 10.1053/j.gastro.2017.02.001.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of an HLA class I allele closely involved in the auto-antigen presentation in acquired aplastic anemia. (2017)
  • 著者名/発表者名: Zaimoku Y, Takamatsu H, Hosomichi K, Ozawa T, Nakagawa N, Imi T, Maruyama H, Katagiri T, Kishi H, Tajima A, Muraguchi A, Kashiwase K, Nakao S.
  • 雑誌名: Blood 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • DOI: 10.1182/blood-2016-11-752378.
  • 査読あり
• [雑誌論文] A novel, rapid and efficient method of cloning functional antigen-specific T-cell receptors from single human and mouse T-cells. (2016)
  • 著者名/発表者名: Hamana H, Shitaoka K, Kishi H, Ozawa T, Muraguchi A.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun. 巻: 474 ページ: 709-14
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2016.05.015.
  • 査読あり
• [雑誌論文] TRAIL-receptor 1 IgM antibodies strongly induce apoptosis in human cancer cells in vitro and in vivo. (2016)
  • 著者名/発表者名: Piao X, Ozawa T, Hamana H, Shitaoka K, Jin A, Kishi H, Muraguchi A.
  • 雑誌名: Oncoimmunology 巻: 5 ページ: e1131380
  • DOI: 10.1080/2162402X.2015.1131380.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Fully human monoclonal antibodies to TRAIL-R1 enhance TRAIL-induced apoptosis via activation of caspase-8 pathway. (2016)
  • 著者名/発表者名: Hao Z, Han X, Sun X, Shen M, Huang J, Li Y, Ozawa T, Pang D, Jin S, Kishi H, Muraguchi A, Jin A.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun. 巻: 475 ページ: 238-44
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2016.05.089.
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Capture of esophageal and breast cancer cells with polymeric microfluidic devices for CTC isolation. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ohnaga T, Shimada Y, Takata K, Obata T, Okumura T, Nagata T, Kishi H, Muraguchi A, Tsukada K.
  • 雑誌名: Mol Clin Oncol. 巻: 4 ページ: 599-602
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] TCR repertoire of CD4+CD25+CD137+Foxp3+ tumor infiltrating lymphocytes in mice. (2016)
  • 著者名/発表者名: Kishi H, Hamana H, Shitaoka K, Lyu F, Ozawa T, Muraguchi A.
  • 学会等名: 第45回日本免疫学会学術集会
  • 発表場所: 沖縄コンベンションセンター（沖縄県宜野湾市）
  • 年月日: 2016-12-05 – 2016-12-07
• [学会発表] Single-T-cell manipulation method using microwell array chip (T-ISAAC) allows rapid and efficient cloning of antigen-specific TCRs. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ozawa T, Kishi H, Hamana H, Tajiri K, Muraguchi A.
  • 学会等名: 第45回日本免疫学会学術集会
  • 発表場所: 沖縄コンベンションセンター（沖縄県宜野湾市）
  • 年月日: 2016-12-05 – 2016-12-07
• [学会発表] A rapid and easy system for cDNAs cloning of antigen specific TCRs from single human and mouse T-cells within 4 days. (2016)
  • 著者名/発表者名: Hamana H, Kishi H, Shitaoka K, Ozawa T, Muraguchi A.
  • 学会等名: 第45回日本免疫学会学術集会
  • 発表場所: 沖縄コンベンションセンター（沖縄県宜野湾市）
  • 年月日: 2016-12-05 – 2016-12-07
• [学会発表] T cell receptor obtained from tumor-infiltrating lymphocytes without using tumor-specific antigens exhibits cytotoxicity to tumors in vitro and in vivo. (2016)
  • 著者名/発表者名: Shitaoka K, Kishi H, Hamana H, Hayakawa Y, Ozawa T, Muraguchi A.
  • 学会等名: 第45回日本免疫学会学術集会
  • 発表場所: 沖縄コンベンションセンター（沖縄県宜野湾市）
  • 年月日: 2016-12-05 – 2016-12-07
• [学会発表] TCR repertoire analysis of OVA-specific T-cells infiltrating into OVA-expressing-melanoma during tumor progression. (2016)
  • 著者名/発表者名: Lyu F, Shitaoka K, Hamana H, Hayakawa Y, Kishi H, Muraguchi A.
  • 学会等名: 第45回日本免疫学会学術集会
  • 発表場所: 沖縄コンベンションセンター（沖縄県宜野湾市）
  • 年月日: 2016-12-05 – 2016-12-07
• [学会発表] Epitopes and tissue reactivity of monoclonal anti-TRIM21/Ro52 autoantibodies isolated from collagen disease-patients with interstitial lung disease. (2016)
  • 著者名/発表者名: Okumura M, Ozawa T, Taki H, Kishi H, Muraguchi A.
  • 学会等名: 第45回日本免疫学会学術集会
  • 発表場所: 沖縄コンベンションセンター（沖縄県宜野湾市）
  • 年月日: 2016-12-05 – 2016-12-07
• [学会発表] Development of novel human anti-HLA-monoclonal antibodies for clinical applications using peripheral blood B cells derived from anti-HLA antibody-positive donors. (2016)
  • 著者名/発表者名: Takamatsu H, Zaimoku Y, Ozawa T, Kawai S, Tanaka H, Kishi H, Muraguchi A, Nakao S.
  • 学会等名: 58th ASH Annual Meeting & Exposition
  • 発表場所: San Diego（米国）
  • 年月日: 2016-12-03 – 2016-12-06
  • 国際学会
• [学会発表] ISAAC法を用いた抗原特異的T細胞検出法の開発． (2016)
  • 著者名/発表者名: 小澤龍彦，岸 裕幸，浜名 洋，田尻和人，呂 福蓮，村口 篤．
  • 学会等名: 第39回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • 年月日: 2016-11-30 – 2016-12-02
• [学会発表] 免疫細胞療法の最新動向と今後の展開． (2016)
  • 著者名/発表者名: 神垣 隆，安元公正，岸 裕幸，下岡清美，富山 舞．
  • 学会等名: 第22回国際個別化医療学会学術集会
  • 発表場所: 大崎ブライトコアホール（東京都品川区）
  • 年月日: 2016-10-29
• [学会発表] 腫瘍浸潤リンパ球の単一細胞解析による腫瘍特異的TCRの同定および治療への応用（担癌マウスモデル）． (2016)
  • 著者名/発表者名: 岸 裕幸，村口 篤．
  • 学会等名: 第75回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • 年月日: 2016-10-06 – 2016-10-08
• [学会発表] CT26腫瘍局所浸潤CD8+T細胞のTCRレパトア解析と認識エピトープの同定． (2016)
  • 著者名/発表者名: 藤井啓介，宮原慶裕，村岡大輔，下岡清美，浜名 洋，岸 裕幸，珠玖 洋．
  • 学会等名: 第75回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県横浜市）
  • 年月日: 2016-10-06 – 2016-10-08
• [学会発表] 関節リウマチ患者由来モノクローナル抗CCP抗体の取得と抗原の解析． (2016)
  • 著者名/発表者名: 岸 裕幸，津田玲奈，小澤龍彦，村口 篤．
  • 学会等名: 第28回日本神経免疫学会学術集会
  • 発表場所: 長崎ブリックホール（長崎県長崎市）
  • 年月日: 2016-09-29 – 2016-09-30
  • 招待講演
• [学会発表] Rapid generation of monoclonal antibodies using lymphocyte-microarray chip. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ozawa T, Kishi H., and Muraguchi A.
  • 学会等名: 第68回日本生物工学会大会国際シンポジウム
  • 発表場所: 富山国際会議場（富山県富山市）
  • 年月日: 2016-09-28 – 2016-09-30
  • 国際学会 / 招待講演
• [学会発表] Cis-interaction of TCRs and antigen/MHC class I complexes on CD8+ T cells causes their activation. (2016)
  • 著者名/発表者名: Kishi H, Jin A, Hamana H, Shitaoka K, Tajiri K, Kobayashi E, Kusano S, Yokoyama S, Ozawa T, Nagai T, Obata T, Hatakeyama S, Horii M, Hu Y, Zhang F, Muraguchi A.
  • 学会等名: 2016 International Congress of Immunology
  • 発表場所: Melbourne（豪州）
  • 年月日: 2016-08-21 – 2016-08-26
  • 国際学会
• [学会発表] A rapid and efficient single-cell manipulation method using microwell array chip (ISAAC) technology for screening antigen-specific cytokines-secreting T-cells. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ozawa T, Kishi H, Hamana H, Tajiri K, Lyu F, Muraguchi A.
  • 学会等名: 2016 International Congress of Immunology
  • 発表場所: Melbourne（豪州）
  • 年月日: 2016-08-21 – 2016-08-26
  • 国際学会
• [学会発表] A rapid and easy system for screening of antigen-specific TCRs. (2016)
  • 著者名/発表者名: Hamana H, Kishi H, Shitaoka K, Piao X, Ozawa T, Muraguchi A.
  • 学会等名: 2016 International Congress of Immunology
  • 発表場所: Melbourne（豪州）
  • 年月日: 2016-08-21 – 2016-08-26
  • 国際学会
• [学会発表] Identification of tumor-specific T cell receptors of primary tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) from B16F10 melanoma-bearing mice at single cell levels. (2016)
  • 著者名/発表者名: Shitaoka K, Hamana H, Kishi H, Ozawa T, Muraguchi A.
  • 学会等名: 2016 International Congress of Immunology
  • 発表場所: Melbourne（豪州）
  • 年月日: 2016-08-21 – 2016-08-26
  • 国際学会
• [学会発表] Establishment of West Nile virus-neutralizing human monoclonal antibodies derived from the individuals vaccinated with inactivated Japanese encephalitis virus by ISAAC technology. (2016)
  • 著者名/発表者名: Masaki H., Ozawa T., Takasaki T., Aoyama I., Yumisashi T., Konishi E., Kishi H., and Muraguchi A.
  • 学会等名: 2016 International Congress of Immunology
  • 発表場所: Melbourne（豪州）
  • 年月日: 2016-08-21 – 2016-08-26
  • 国際学会
• [学会発表] びまん性大細胞型B細胞リンパ腫における腫瘍浸潤CD8+Tリンパ球由来T細胞受容体および腫瘍微小環境の解析． (2016)
  • 著者名/発表者名: 村橋睦了，浜名 洋，松本太一，鍋島一樹，猪狩洋介，佐々木秀法，原 周司，谷 憲三朗，岸 裕幸，高松 泰．
  • 学会等名: 第14回日本臨床腫瘍学会学術集会
  • 発表場所: 神戸国際会議場（兵庫県神戸市）
  • 年月日: 2016-07-28 – 2016-07-30
• [学会発表] B16F10メラノーマ浸潤リンパ球の単一細胞解析による，がん特異的T細胞の同定およびTCR遺伝子治療の試み． (2016)
  • 著者名/発表者名: 下岡清美，浜名 洋，呂 福蓮，小澤龍彦，早川芳弘，岸 裕幸，村口 篤．
  • 学会等名: 第20回日本がん免疫学会総会
  • 発表場所: 大阪国際交流センター（大阪府大阪市）
  • 年月日: 2016-07-27 – 2016-07-29
• [学会発表] CT26腫瘍局所浸潤CD8+T細胞のTCRレパトア解析と認識エピトープの同定． (2016)
  • 著者名/発表者名: 藤井啓介，宮原慶裕，村岡大輔，下岡清美，浜名 洋，岸 裕幸，珠玖 洋．
  • 学会等名: 第20回日本がん免疫学会総会
  • 発表場所: 大阪国際交流センター（大阪府大阪市）
  • 年月日: 2016-07-27 – 2016-07-29
• [学会発表] 次世代シーケンサーとsingle cell sortingを用いた同種抗原反応性T細胞の網羅的解析． (2016)
  • 著者名/発表者名: 川瀬孝和，坂本 葵，樗木 錬，美山貴彦，柴田真志，田中清人，北浦一孝，大島久美，浜名 洋，岸 裕幸，葛島清隆，佐治博夫，鈴木隆二，一戸辰夫．
  • 学会等名: 第20回日本がん免疫学会総会
  • 発表場所: 大阪国際交流センター（大阪府大阪市）
  • 年月日: 2016-07-27 – 2016-07-29