| 研究課題/領域番号 |
26293254
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| 研究機関 | 弘前大学 |
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研究代表者 |
澤村 大輔 弘前大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (60196334)
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| 研究分担者 |
松崎 康司 弘前大学, 医学部附属病院, 講師 (50322946)
中野 創 弘前大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (90281922)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 遺伝子 / 自己免疫 / 皮膚 / 水疱 / マウス |
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| 研究実績の概要 |
水疱性類天疱瘡は，表皮下水疱と抗基底膜抗体を特徴とする自己免疫性水疱症である．本症の自己抗体が認識する自己抗原は，180kDaと230kDa類天疱瘡抗原(BP180とBP230)である．BP230への自己抗体の病原性，またBP230の表皮真皮結合能や新規機能の詳細を，解明するのが本研究の主な目的である．そのために，コンディショナルノックアウトマウスを用い，１）BP230に対する自己抗体を有するモデル動物の作製，２）BP230のノックアウト状態の長期観察，３）表皮に限局する皮膚欠損の作製，を行う.
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
今年までに, コンディショナルノックアウトのベクターのデザインと作製を行った．すなわち, マウスBP230の遺伝子配列から，遺伝子発現や遺伝子のスプライシングに影響のないイントロンを選択した．それにより，Neo遺伝子の挿入部位，FRT部位, LoxP部位を設定．今回は，トランスジェニック社に委託し，ベクターの構築，ベクターのES細胞への導入，ホモロガスリコンビネーション成功クローンの選択，3-5日胚盤胞への注入，ヘテロマウスの選択を行った．さらに, BP230遺伝子のノックアウトの交配と解析を行っている．すなわち, 受けたconKOヘテロマウスを正常マウスと交配し，戻し交配を行った．さらに，マウスの数を増やし実験を確実なものにする予定であり, 順調に経過している．
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は, BP230への自己抗体の病原性，BP230の表皮真皮結合機能の詳細，他の新規機能，を明らかにするために, 以下のコンディショナルマウス(conKO)を用いる実験を計画している．BP230遺伝子のノックアウトの交配と解析供給を受けたconKOヘテロマウスを正常マウスと交配し，戻し交配を行う．すでに予備的な実験を行い，ヘテロの同士の交配から，BP230のノックアウト（KO）マウス得る．今後，BP230 遺伝子の発現，その他の基底膜遺伝子の発現，組織学的な水疱を確認する．また，電顕的に，BP230の存在するヘミデスモゾームのプラークの構造やその他の基底膜の構造異常なども検討する．さらに, Flpマウスとの交配実験よるfloxマウスの作製を行う．FlpマウスはFlp recombinaseが全身の細胞で高発現するトランスジェニック（TG）マウスである．このFlpマウスとconKOヘテロマウス交配する．その結果，イントロンにはFRT部位のみ残り，遺伝子の機能は損なわれない．このマウスは，loxPにはさまれる領域が除かれる準備ができているから，floxマウスと呼ばれる．
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