| 研究課題/領域番号 |
26293254
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| 研究機関 | 弘前大学 |
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研究代表者 |
澤村 大輔 弘前大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (60196334)
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| 研究分担者 |
松崎 康司 弘前大学, 医学部附属病院, 講師 (50322946)
中野 創 弘前大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (90281922)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 遺伝子 / 自己免疫 / 皮膚 / 水疱 / マウス |
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| 研究実績の概要 |
水疱性類天疱瘡は，表皮下水疱と抗基底膜抗体を特徴とする自己免疫性水疱症である．本症の自己抗体が認識する自己抗原は，180kDaと230kDa類天疱瘡抗原(BP180とBP230)である．現在までに, 自己抗原の解析は進んだが，自己抗体の病原性についての証明はなかなか進まなかった．つまり，患者の自己抗体が動物のBP抗原を認識しないため，自己抗体を動物に移入しても病変が形成されなかった．申請者のグループはBP180の遺伝子改変マウスを駆使し，マウスのBP180のヒト化に成功し，BP180を認識する自己抗体が病変を起こすことを初めて証明した．その後，さらに新しい動物モデルを作成 BP180のエピトープの解析を行っている.さて，水疱性類天疱瘡においてBP180への自己抗体が病変を形成していることが明らかになったが，BP230に対する自己抗体に関しては，病態と関連を示す実験はない．そこで、BP230への自己抗体の病原性，またBP230の表皮真皮結合能や新規機能の詳細を，解明するのが本研究の主な目的である．そのために，コンディショナルノックアウトマウスを用い，１）BP230に対する自己抗体を有するモデル動物の作製，２）BP230のノックアウト状態の長期観察，３）表皮に限局する皮膚欠損の作製，を現在進行中である．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
BP230への自己抗体の病原性，BP230の表皮真皮結合機能の詳細，他の新規機能，を明らかにするために、今年度は、以下のコンディショナルマウス(conKO)を用いる実験を行った。BP230遺伝子のノックアウトの交配と解析：供給を受けたconKOヘテロマウスを正常マウスと交配し，戻し交配を行った。得られたノックアウトマウスは，１－２週間で、筋肉のジストニアを発症し１－２週間で死亡し、過去に作製されたKOマウスとはデザインは異なるが,表現型のみは変わらない結果を得た． Flpマウスとの交配実験よるfloxマウスの作製：FlpマウスはFlp recombinaseが全身の細胞で高発現する トランスジェニッ（TG）マウスである．このFlpマウスとconKOヘテロマウス交配した．このマウスは，loxPにはさまれる領域が除かれる準備ができたことから，floxマウスとよんだ．表皮特異的欠損状態の解析：表皮特異的conKOマウスの表現型の観察，組織学的な検討を行った．また，その他の基底膜蛋白の発現を蛍光抗体で観察した．以上研究は順調に頚窩している。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は、表皮特異的conKOマウスの表現型の観察，組織学的な検討を行う．また，その他の基底膜蛋白の発現を蛍光抗体で観察する．さらに、その表皮特異的conKOマウスから表皮細胞を培養し，分化に関連する遺伝子，遊走に関連する遺伝子の発現をRT-PCRとウエスタンブロットで測定する．さらに，スクラッチテストで細胞の遊走能を測定する．また，マウス230BP遺伝子の導入で正常化するかも確認する．また，電顕的に，BP230の存在するヘミデスモゾームのプラークの構造やその他の基底膜の構造異常なども検討する．
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