研究課題/領域番号 |
26293299
|
研究機関 | 千葉大学 |
研究代表者 |
宮崎 勝 千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (70166156)
|
研究分担者 |
高野 重紹 千葉大学, 医学部附属病院, 助教 (20436380)
久保木 知 千葉大学, 医学部附属病院, 助教 (50571410)
吉富 秀幸 千葉大学, 医学部附属病院, 講師 (60375631)
加藤 厚 千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (70344984)
清水 宏明 千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (80272318)
大塚 将之 千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (90334185)
賀川 真吾 千葉大学, 医学部附属病院, 助教 (90507302)
|
研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
|
キーワード | 癌 / 外科 / プロテオーム |
研究実績の概要 |
1)2-DEによって見出された癌高発現候補蛋白cofilin-1の血中への逸脱による血管内に循環する抗原(候補蛋白)、その抗原に対する自己免疫反応により生成される自己抗体、さらにはそれらの複合体(抗原抗体複合体)をdetectするsandwich ELISAの系をそれぞれ作製し、その測定値が再現性のあるものかを検討した。まず最初に試みた抗原に対するELISA測定系では、再現性の得られる測定系は確立出来ず、自己抗体に対する測定系でも安定した値は得られなかった。それに対し抗原抗体複合体物質に対するsandwich ELISAでは、安定した再現性が得られ実験系を確立した。 2)血中の候補蛋白関連物質の存在量測定および血中マーカーとしての感度・特異度の検定。まず候補蛋白関連物質cofilin-1の膵癌と健常人においての測定値の違いを検討した。すると、膵炎患者検体を含めた3群間において、膵癌では健常人、膵炎と比較し、cofilin-1の血清中免疫複合体値は有意に高値であった。さらに、膵癌の進行度が進むにつれて、血清値は上昇し、Kaplan-Meier解析では中央値で高低値群の2群に分けると、高値群では有意に予後不良であった(p=0.039)。
|
現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
昨年度の研究結果に関しては、同定された候補蛋白の同定、validation、および血中の免疫複合体の測定系の確立等、予定されていた研究はおおむね順調に進展していると考えられる。さらにcofilin蛋白の免疫染色法による膵癌組織における蛋白発現の強弱と臨床病理学的特徴との相関を解析した。研究の進捗状況としては現在、膵癌細胞株を用いたcofilin蛋白の機能解析を行っているところである。今後、さらに今年度の研究を計画通り発展させていきたい。さらに外部への情報、成果の発信については、昨年度に癌学会の口演発表を含む2件行った。論文投稿に関しては今年中を目安に海外のjournalへの投稿を予定している。
|
今後の研究の推進方策 |
1)原発巣~血管内循環~遠隔巣に対する転移メカニズムへのアプローチ。現在有望な候補と思われるCofilinについては近年、いくつかの癌種で浸潤や遠隔巣への転移への関わりが報告されている。さらに、膵癌細胞においてはZebrafishを用いた研究によりCofilin pathwayの中でCofilinのリン酸化に関与するLIM kinaseを抑えることにより血管新生および転移に対する抑制効果を示す報告も認められてきている。これらの背景をもとに膵癌細胞株を用いて特異的siRNAおよびLIM kinaseの阻害剤を用いることでCofilinの膵癌細胞におけるin vitroでの機能解析(invasion assay, soft agar assay, pancreatosphere assay等)を行い、浸潤、転移巣への生着、転移巣でのself-renewal capacityおよび増殖能についての検討を行う。 2)膵癌マウスモデルPdx1CreKrasG12D/+p53fl/flにYFPをlabelingしたtransgenic mouse (PKCY mouse: Rhim AD , Stanger BZ et al. Cell 2012)よりprimary cultureしたmouse膵癌細胞を用いヌードマウスの膵臓に直接癌細胞を注射するorthotopic transplantation膵癌モデル, およびintraportal vein injectionによる肝転移モデルマウスを用い、CTCの数、p-CofilinのEMTさらにCofilinのMETへの関与をCofilin pathwayの活性化を抑制した際に実際に転移能が抑制されるかをin vivoで確認しcancer progressionにおける転移へのmechanismを解明していく。
|