| 研究実績の概要 |
本研究では、新規かつ有用なペプチド・タンパク分析・抽出法として「フルオラスケミストリー」の概念を採り入れた2つの方法論として，（１）脳神経ペプチドをフォーカシングするマルチフルオラス誘導体化−LC-MS/MS分析法，及び（２）配位結合能とフルオラスの選択性を融合したペプチド・タンパクの選択的抽出法，の開発を試みた。
(1) フルオラス誘導体化法を脳内ペプチド類の測定へと適用し，選択的かつ高感度な測定法を開発した。本法は，測定対象物質にパーフルオロアルキル（PFA）基を導入（誘導体化）することで，誘導体をPFA 基修飾LC カラムに選択的に保持させ，分離する方法である。ペプチド内の複数のアミノ基に対し，N-succinimidyl-4,4,5,5,6,6,7,7, 8,8, 9,9,9-tridecafluorononanoate（SITF）にてPFA 基を導入し，妨害成分からの分離及び高感度分析が可能であった。この本法をマウス脳組織中サブスタンスP(SP)分析へと適用したところ，極微量のSPを検出することができた。本法は、複数のアミノ基以外に、複数のSH基、複数のカルボキシル基、アミノ基＋SH基など選択性を残したままに対象物質を拡大できる可能性があると考えられる。
(2) 前年度までに、配位結合能とフルオラスの選択性を融合したフルオラス金属キレートアフィニティー法によるリン酸化ペプチドの選択的抽出法を開発し、これプロテインキナーゼ活性の測定へ適用した。この方法は、従来前処理が極めて困難であったリン脂質の抽出にも適用できることが確認された。今後、更に広範なリン酸化合物に適用できる可能性を示すことができた。
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