| 研究実績の概要 |
生殖機能細胞（精子、卵子、受精卵、ES細胞、iPS細胞）をエネルギーフリーで保存できる新規な真空乾燥・室温保存法を開発することを目的として、本研究を行った。
本研究では、乾燥保護剤としてトレハロースに着目して、その効果をマウス初期胚を用いて確認した。トレハロースは、乾燥のような厳しい環境におかれたネムリユスリカの幼虫等の昆虫の体内で生産・蓄積され、細胞保護効果により乾燥耐性が獲得され、生き延びることができる。そこで、トレハロース（0.1M, 1.0M, 1.5M）を含むPB1, M2, TE及びmCZB-hepesを保存液として、マウス桑実期胚及び胚盤胞の真空乾燥を試みた。まず、保存液に初期胚を浸漬した後、これらの初期胚を含む30μLの保存液をマイクロチューブに移し、室温下にてデシケーター内で真空乾燥を行った。真空乾燥後、直ちに、30μLの滅菌ミリQ水あるいはM2をマイクロチューブに滴下し、復水させた。復水後の初期胚は、修正Whitten's培養液にて２回洗浄したのち、微小滴培養法により、初期胚を培養した。その結果、桑実期胚は、いずれの場合も、細胞膜の膨化及び割球の萎縮が認められ、生存が確認できなかった。また、胚盤胞においては、1.5Mトレハロースを含むM2を保存液として用いた真空乾燥、及び復水にM2を用いた場合にのみ、細胞の破壊等が認められず、正常な形態を維持していたが、培養後、拡大胚盤胞へ発生した胚は、認められなかった。
一方、トレハロースの細胞における乾燥耐性の獲得には、細胞内での蓄積が必要であると推測されるが、トレハロースは高分子のため細胞内に取り込まれることはないと思われる。そこで、初期胚の細胞内にトレハロースを取り込ませることのできるトレハローストランスポーター遺伝子を細胞膜で発現するノックインマウスの作製を試み、当該遺伝子が挿入されているマウスを同定できた。
|
