|
Brk (Breast tumor kinase) は細胞内に存在する非受容体型チロシンキナーゼである。Brkは多くの乳がん細胞や卵巣がん細胞に発現が見られ，浸潤性乳管がん細胞においては大多数で過剰発現しているという報告もある。一方，signal-transducing adaptor protein (STAP) -2 の機能の一つはBrkの活性化であることが発見された。したがってSTAP-2 とBrk との間の相互作用の分子レベルでの緻密な解析が必要である。
調製した野生型Brkを用い，自己リン酸化反応を検出した。ATPおよびMg(II)イオンの存在下でのみBrkがチロシンリン酸化されることを確認した。また，基質としてSTATを与えると，STATのリン酸化が検出できた。変異体においては，自身のリン酸化能が上昇するものおよび，低下するものが見られた。基質として使用したSTATに対してするリン酸化能にも相関が見られた。STAP-2の非存在下および存在下において，Brkの自己リン酸化およびSTAT1のリン酸化を検出したところ，STAP-2が存在することでリン酸化が亢進する。
BrkとSTAP-2間の相互作用解析を行ったところ，非常に強い相互作用をもつことがわかった。この値はpY-Brkとu-STAP2のKD値との一致が見られ， Brkのリン酸化は非リン酸化STAP-2との結合に影響しないことがわかった。
非リン酸化Brkおよびリン酸化Brk に関し，Photon FactoryのBL10Cを用いてSEC-MALSおよびSEC-SAXS測定をおこない， ab initioモデル構築した。予想に反し， 野生型Brkはリン酸化型・非リン酸化型ともに慣性半径26オングストローム;程度のコンパクトな構造をとっており，構築されたモデルもよく似ていた。
|
