血小板凝集因子ポドプラニンの腫瘍型糖鎖構造の徹底解明と抗体医薬開発

2016 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 26440019
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 金子 美華 東北大学, 医学系研究科, 准教授 (00323163)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2017-03-31
• キーワード: CasMab / 腫瘍型糖鎖構造 / 糖転移酵素関連遺伝子 / 抗体医薬開発 / 糖鎖

研究実績の概要

ポドプラニン（PDPN）は、種々の腫瘍に高発現しているムチン型糖タンパク質で、リンパ管マーカーやがん幹細胞群マーカーとして使用されている。申請者らは腫瘍組織由来PDPN上に腫瘍特異的な糖鎖修飾の存在を示すデータを得て、腫瘍型PDPNを認識する複数の新規抗体を取得した。
本研究では、これらの抗体を利用してPDPN上の腫瘍型糖鎖構造とその生合成機序を徹底的に解明し、さらに、PDPN上の腫瘍特異的糖鎖構造のがん幹細胞形質への関与を調べること、また、得られた腫瘍型糖鎖構造認識抗体の抗体医薬開発の可能性を検証することを目的とした。
本年度は、N末端にタグを付加した複数種類のN末端欠損型PDPN安定発現株樹立により、特定の付加部位に腫瘍特異的糖鎖構造を保持した腫瘍型PDPN発現細胞の安定供給を行い、これまでに得られた複数の腫瘍特異的抗体の抗原となる糖鎖修飾部位特定のための実験に供した。また、GnTIノックアウト細胞株、シアル酸トランスポーターノックアウト細胞株、ガラクトーストランスポーターノックアウト細胞株など、レクチンで表現型の変化を簡単に検出出来る糖鎖不全細胞株を樹立し、樹立した糖鎖不全細胞株に発現している強制発現ではないPDPNに対して、これまでに得られた複数の腫瘍型糖鎖構造認識抗体の反応性を確認し、どのような糖鎖構造が腫瘍特異的抗体の抗原となっているかを推定した。さらに腫瘍型糖鎖構造認識抗体について、ヒトキメラ型に変換し、マウスにおける抗腫瘍実験を実施し、腫瘍特異的抗体の抗腫瘍効果を検証した。ヒトキメラ型に変換した際、活性が低くなってしまった抗体について、L鎖の改良など実施し、抗体結合活性が上昇する結果として抗腫瘍活性が上昇することを確認した。

研究成果

• [雑誌論文] Antitumor activity of chLpMab-2, a human-mouse chimeric cancer-specific antihuman podoplanin antibody, via antibody-dependentcellular cytotoxicity. (2017)
  • 著者名/発表者名: Kaneko MK, Yamada S, Nakamura T, Abe S, Nishioka Y, Kunita A, Fukayama M,Fujii Y, Ogasawara S, Kato Y.
  • 雑誌名: Cancer Med 巻: - ページ: -
  • DOI: 10.1002/cam4.1049.
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Antiglycopeptide Mouse Monoclonal Antibody LpMab-21 Exerts Antitumor Activity Against Human Podoplanin Through Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity and Complement-Dependent Cytotoxicity. (2017)
  • 著者名/発表者名: Kato Y, Kunita A, Fukayama M, Abe S, Nishioka Y, Uchida H, Tahara H, Yamada S,Yanaka M, Nakamura T, Saidoh N, Yoshida K, Fujii Y, Honma R, Takagi M, Ogasawara S, Murata T, Kaneko MK.
  • 雑誌名: Monoclon Antib Immunodiagn Immunother. 巻: 36(1) ページ: 20-24
  • DOI: 10.1089/mab.2016.0045.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Chimeric Anti-Human Podoplanin Antibody NZ-12 of Lambda Light Chain Exerts Higher Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity and Complement-Dependent Cytotoxicity Compared with NZ-8 of Kappa Light Chain. (2017)
  • 著者名/発表者名: Kaneko MK, Abe S, Ogasawara S, Fujii Y, Yamada S, Murata T, Uchida H, Tahara H, Nishioka Y, Kato Y.
  • 雑誌名: Monoclon Antib Immunodiagn Immunother. 巻: 36(1) ページ: 25-29
  • DOI: 10.1089/mab.2016.0047.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Development and characterization of anti-glycopeptide monoclonal antibodies against human podoplanin, using glycan-deficient cell lines generated by CRISPR/Cas9 and TALEN. (2017)
  • 著者名/発表者名: Kaneko MK, Nakamura T, Honma R, Ogasawara S, Fujii Y, Abe S, Takagi M, Harada H, Suzuki H, Nishioka Y, Kato Y.
  • 雑誌名: Cancer Med. 巻: 6(2) ページ: 382-396
  • DOI: 10.1002/cam4.954.
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Podoplanin Expression in Canine Melanoma. Monoclon Antib Immunodiagn Immunother. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ogasawara S, Honma R, Kaneko MK, Fujii Y, Kagawa Y, Konnai S, Kato Y.
  • 雑誌名: Monoclon Antib Immunodiagn Immunother. 巻: 35(6) ページ: 304-306
  • DOI: 10.1089/mab.2016.0040.
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] MAP Tag: A Novel Tagging System for Protein Purification and Detection. (2016)
  • 著者名/発表者名: Fujii Y, Kaneko MK, Kato Y.
  • 雑誌名: Monoclon Antib Immunodiagn Immunother. 巻: 35(6) ページ: 293-299
  • DOI: 10.1089/mab.2016.0039.
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] PMab-38 Recognizes Canine Podoplanin of Squamous Cell Carcinomas. (2016)
  • 著者名/発表者名: Kaneko MK, Honma R, Ogasawara S, Fujii Y, Nakamura T, Saidoh N, Takagi M, Kagawa Y, Konnai S, Kato Y.
  • 雑誌名: Monoclon Antib Immunodiagn Immunother 巻: 35(5) ページ: 263-266
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] LpMab-19 Recognizes Sialylated O-Glycan on Thr76 of Human Podoplanin. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ogasawara S, Kaneko MK, Kato Y.
  • 雑誌名: Monoclon Antib Immunodiagn Immunother 巻: 35(5) ページ: 245-253
  • 査読あり
• [雑誌論文] Specific Detection of Dog Podoplanin Expressed in Renal Glomerulus by a Novel Monoclonal Antibody PMab-38 in Immunohistochemistry. (2016)
  • 著者名/発表者名: Honma R, Kaneko MK, Ogasawara S, Fujii Y, Konnai S, Takagi M, Kato Y.
  • 雑誌名: Monoclon Antib Immunodiagn Immunother. 巻: 35(4) ページ: 212-216
  • DOI: 10.1089/mab.2016.0022.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Establishment of Mouse Monoclonal Antibody LpMab-13 Against Human Podoplanin. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ogasawara S, Kaneko MK, Honma R, Oki H, Fujii Y, Takagi M, Suzuki H, Kato Y.
  • 雑誌名: Monoclon Antib Immunodiagn Immunother. 巻: 35(3) ページ: 155-162
  • DOI: 10.1089/mab.2016.0006.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Antitumor effect of novel anti-podoplanin antibody NZ-12 against malignant pleural mesothelioma in an orthotopic xenograft model. (2016)
  • 著者名/発表者名: Abe S, Kaneko MK, Tsuchihashi Y, Izumi T, Ogasawara S, Okada N, Sato C, Tobiume M, Otsuka K, Miyamoto L, Tsuchiya K, Kawazoe K, Kato Y, Nishioka Y.
  • 雑誌名: Cancer Sci. 巻: 107(9) ページ: 1198-1205
  • DOI: 10.1111/cas.12985.
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] PMab-44 Detects Bovine Podoplanin in Immunohistochemistry. (2016)
  • 著者名/発表者名: Honma R, Ogasawara S, Kaneko MK, Fujii Y, Oki H, Nakamura T, Takagi M, Konnai S, Kato Y.
  • 雑誌名: Monoclon Antib Immunodiagn Immunother. 巻: 35(4) ページ: 186-190
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] LpMab-12 Established by CasMab Technology Specifically Detects Sialylated O-Glycan on Thr52 of Platelet Aggregation-Stimulating Domain of Human Podoplanin. (2016)
  • 著者名/発表者名: Kato Y, Ogasawara S, Oki H, Goichberg P, Honma R, Fujii Y, Kaneko MK.
  • 雑誌名: PLoS One. 巻: 11(3) ページ: e0152912
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0152912.
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [学会発表] The chimeric antibody NZ-12 or CAR T cells targeting human podoplanin possesses antitumor activity against orthotopic xenograft models (2016)
  • 著者名/発表者名: Yukinari Kato, Satoshi Shiina, Atsushi Natsume, Shinji Abe, Yasuhiko Nishioka, Satoshi Ogasawara, Mika K. Kaneko
  • 学会等名: AACR, Tumor Immunology and Immunotherapy
  • 発表場所: ボストン（アメリカ）
  • 年月日: 2016-10-22 – 2016-10-22
  • 国際学会
• [学会発表] CasMab法により樹立したLpMab-12抗体はポドプラニンの活性中心の糖鎖構造を認識する (2016)
  • 著者名/発表者名: 金子美華、小笠原諭、藤井勇樹、加藤幸成
  • 学会等名: 第８９回日本生化学会大会
  • 発表場所: 仙台国際センター（仙台市）
  • 年月日: 2016-09-27 – 2016-09-27
• [学会発表] A cancer-specific monoclonal antibody against podocalyxin developed by CasMab technology inhibited the tumor growth by antibody-dependent cellular cytotoxicity (2016)
  • 著者名/発表者名: Yukinari Kato, Satoshi Ogasawara, Yuki Fujii, Mika K. Kaneko
  • 学会等名: AACR annual meeting 2016
  • 発表場所: ニューオリンズ（アメリカ）
  • 年月日: 2016-04-19 – 2016-04-19
  • 国際学会
• [備考] 東北大学 抗体創薬研究分野
  • URL: http://www.med-tohoku-antibody.com