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出芽酵母のRfu1はエンドソームに局在し、脱ユビキチン化酵素 Doa4の活性を阻害することによって、フリーのユビキチン鎖と単量体のユビキチンの量を制御する因子である。本研究ではまず、Rfu1のエンドソーム局在化において、Doa4をエンドソームにリクルートする因子Bro1が、Rfu1もエンドソームにリクルートすることを明らかにした。Bro1とRfu1は直接結合し、Bro1のVドメインとRfu1のYPEL モチーフが結合に必須だった。したがって、Doa4のポジティブ制御因子であるBro1は、Doa4のネガティブ制御因子であるRfu1も制御していることがわかった。
哺乳類ホモログAlixのV ドメインはターゲットタンパク質のYP(X)nLに結合し、Vドメイン中の疎水性のくぼみにあるPhe残基が結合に必要である。酵母では、Bro1とRim20がV ドメインを持つ。今回、これらの酵母VドメインとAlix V ドメインでは全体的にはあまり保存されていないがPheの周辺配列は保存されていることに気づいた。そして、Bro1 V ドメインとRfu1との結合にも、Bro1 V ドメインのPheが重要であることがわかった。また、Rim20とRim101の結合も、Rim20 V ドメインとRim101中のYPIKLを介した結合であり、Rim20 VドメインのPheが重要だった。以上より酵母のV ドメインも哺乳類のV ドメインと同様にYP(X)nLモチーフに結合し、V ドメイン中のPheが結合に重要であることがわかった。哺乳類では、Alix のV ドメインとレトロウイルスgagタンパク質との相互作用は、ウイルスの出芽に必要である。本課題研究で、酵母においてもこの相互作用が保存されていることが明らかにされたことから、酵母を用いたV ドメインの解析が哺乳類の研究にも知見を与えることが期待された。
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