| 研究実績の概要 |
鞭毛・繊毛の屈曲運動は多種類のモータータンパク質・ダイニンによって駆動されている。最近、緑藻クラミドモナスにおいて、鞭毛根本に局在する微量なダイニン（マイナーダイニン）が新たに見出された。本研究では、このダイニンの機能を調べるために、次の２つの実験を行った。
１）マイナーダイニンの変異株の単離
クラミドモナスゲノムに外来遺伝子を挿入して遺伝子を破壊する株のライブラリーを作成し、その中からマイナーダイニン重鎖の破壊株を単離した。遺伝子破壊は米国スタンフォード大学の Jonikas 博士の研究室で作成されたものを用いた。1次スクリーニングでは、破壊箇所のゲノムＤＮＡの部分配列を読み、それぞれの重鎖遺伝子破壊株の候補を得た。２次スクリーニングでは、それらの細胞から鞭毛を単離し、各ダイニン重鎖に特異的な抗体を用いたウェスタン解析により、それが実際に重鎖を欠失しているかを調べた。４種類あるマイナーダイニンのうち、これまでに２種類の欠失株を得ることに成功した。
２）ダイニンのモーター活性の解析
クラミドモナス鞭毛からダイニンを単離精製し、その微小管モーター活性を in vitro で調べる実験を行った。精製には、陰イオン交換カラム MonoQ を用いた。これまでに、このカラムから各マイナーダイニンが溶出される位置を抗体を用いて確認した。4種類のマイナーダイニンのうち、DHC3, DHC12 は他のメジャーダイニンとは重ならない溶出位置に分離されたが、DHC4, DHC11 は他のメジャーダイニンの溶出位置と重なりうまく分離できないことがわかった。現在、多量の細胞から、前者２つのダイニンを精製し、微小管に対するモーター活性を調べる実験を行っている。
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