| 研究課題/領域番号 |
26440158
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| 研究機関 | 公益財団法人サントリー生命科学財団 |
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研究代表者 |
小山 知嗣 公益財団法人サントリー生命科学財団, その他部局等, 研究員 (90450668)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 植物 / 形態形成 / 転写因子 / 葉 |
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| 研究実績の概要 |
シロイヌナズナTCP転写因子ファミリーは、CIN-like TCPとclass I TCPのサブファミリーに分類される。それぞれのファミリーに関連するシロイヌナズナ変異体の表現型と転写因子機能に着目して、以下の研究を行った。
CIN-TCPサブファミリーでは、各遺伝子変異体の作成が完了し、７重変異体から８重変異体を作成した。その表現型は７重変異体に似たもので複雑化した葉の形態等であった。新たに、葉の発生するタイミングの異常に着目し、予備的データを得た。さらに、CIN-TCPのgain-of-function変異体の表現型解析を進め、TCPの下流で阻害的に働くCUC遺伝子変異体と交配するなどにより、CIN-TCPの活性促進による表現型を解析し、子葉の融合や葉の平滑化などを引き起こすなど期待通りの結果を得た。さらに、TCPの下流で機能するCUC遺伝子の変異体との交配を進め、葉とその他の器官でもCUCとTCPの機能的相互作用を示唆する新たな表現型を得た。
class I サブファミリーでは５重変異体の作成を完了し、表現型解析を進めることができた。
転写因子の下流遺伝子を解明するうえで有力な解析であるクロマチン免疫沈降を行うために、CIN-TCPの3重変異体の形態異常をTCP3-HAで回復できる形質転換体を作成した。抗HA抗体を用いたウエスタンブロット解析と免疫沈降により、クロマチン免疫沈降に必要な予備的なデータと実験材料を得ることができた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
シロイヌナズナ変異体の作成について、CIN-TCPとclass I TCPの両サブファミリーについて、予定通り変異体および形質転換体を作成し、表現型解析を行った。クロマチン免疫沈降に必要な予備的データと実験材料を構築することができ、次年度にむけた準備を完了した。
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| 今後の研究の推進方策 |
本年度に作成した変異体の表現型について、細胞生物学的、分子生物学的な知見を得る。class I-TCPサブファミリーの変異体についてマイクロアレイ解析を行い、class I-TCPにより発現が変動する遺伝子を同定するとともに、in situ hybridization等による発現解析から、変異体の表現型異常の原因を解明する。さらに、次世代シーケンサーを用いて、網羅的なクロマチン免疫沈降を行うことにより、TCP転写因子の下流遺伝子を同定することにより、上記表現型の異常について下流遺伝子の方向からも原因を明らかにする
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| 次年度使用額が生じた理由 |
研究費を有効に使用するために、年度末に試薬と実験消耗品の値引き交渉を行い、納入価格が下がったため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
抗体や酵素等の実験試薬を購入する計画である。
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