| 研究実績の概要 |
平成26年度に作製した組換えサイトカインならびに抗フグサイトカイン抗体を用い、フローサイトメーターを用いた細胞内染色技術の構築を行った。まず初めに、抗フグCD4抗体を用いMACS法によって分取したCD4+T細胞(Th細胞)を免疫賦活剤によって刺激し、サイトカインの産生を誘導した。この時、通常であれば分泌型の分子であるサイトカインは細胞外に放出されるが、この阻止技術について検討した。哺乳類で知られるサイトカイン放出阻止剤: Brefeldin Aまたはmomensinについて検討したところ、Brefeldin Aの使用によって、サイトカインの放出が阻止されることを確認した。続いて、当該技術を用い組換えサイトカインを作用させたTh細胞におけるサイトカイン産生パターンを解析した。その結果、前年度の遺伝子レベルでの結果と同様に、1) Th1サイトカインであるIFN-gammaを作用させたTh細胞においては、IFN-gammaの産生が増加し、2) Th2サイトカインであるIL-4/13を作用させたTh細胞においては、IL4/13の産生が増加することが確認された。続いて、産生されたサイトカインがミエロイド系の細胞を活性化するかについて検討した。まず初めに組換えサイトカイン(IFN-gammaおよびIL-4/13)を魚体に接種し、経時的に摘出した食細胞の活性について測定した。その結果、全てのサイトカイン接種区において食細胞の活性酸素の産生能、貪食能およびリゾチーム活性の増強が認められた。さらに、マルチプレックスRT-PCRアッセイによって、同細胞におけるサイトカイン遺伝子の発現を解析した。
IFN-gammaの接種区においては、IL-1beta, TNF-alpha, IL-6などの炎症性サイトカイン遺伝子の発現誘導が認められた。
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