研究課題
本年度は夏季と冬季にブタ精液を採取し，BTS希釈液で希釈・冷蔵保存中にコレステロールを添加，あるい希釈液の重炭酸を除いた希釈液（BTS-H）で希釈・保存し，精子内cAMP濃度に及ぼす季節の影響及びコレステロールと十炭酸の影響を調べた．前年度と同様BTS希釈液へのコレステロール添加が及ぼす精子内cAMP含有量へ明らかな影響をは見られなかったが，夏季の精子のcAMP含有量は，冬季に比べ高い傾向が見られた．BTS-Hで精液を希釈保存した場合においても精子中のcAMP濃度は，BTS希釈液で希釈した場合と大差はなかったが，夏季において高い傾向があった．cAMP含有量と同様，季節変化を調べる目的で精子内Ca濃度の測定を試みたが，抽出量が不足し，測定されるカルシウム濃度がキットの測定限界以であったため．測定方法を確立できなかった．今後抽出量を増やす方法の検討が必要と思われた．ブタ精子の先体損傷度を測定するためのPNA染色法に改良の余地があったので，ウシ凍結融解精子をモデルとして方法の検討を行った．その結果，塗抹標本よりバイアル内で染色する方法がよく，透過処理剤であるトライトンの減量ができ，固定時間は3％パラホルムアルデヒドで30分が適していることが明らかとなった．
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