| 研究課題/領域番号 |
26450448
|
|---|
| 研究機関 | 東海大学 |
|---|
研究代表者 |
松下 操 東海大学, 工学部, 教授 (00165812)
|
|---|
| 研究分担者 |
浅沼 秀樹 国立感染症研究所, インフルエンザウイルス研究センター, 室長 (40333570)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
|
| キーワード | ニワトリ血清タンパク質 / アミノ酸配列 / 精製 |
|---|
| 研究実績の概要 |
研究代表者は最近ニワトリ血清中よりスカベンジャー受容体システインリッチ(SRCR)ドメインを有する新規タンパク質（CS120）を発見した。本研究は、CS120の構造と機能の解明を目的とし、2014年度は以下の研究成果を得た。
(1) ニワトリの卵白には SRCRドメインを持つタンパク質のEW135が存在する。EW135は輸卵管で産生されるが、RT-PCRの結果から肝臓でEW135と類似構造を持つタンパク質が産生されており、これがCS120と推定された。そこでニワトリ肝臓のcDNAを鋳型にして、EW135cDNAの塩基配列を基に設計したプライマーを用いてPCRを行った。その結果、約2.5kbpのPCR産物が得られた。そのうち1613塩基の配列をシーケンスしてアミノ酸に翻訳したところ、SRCRドメインが複数存在することが判明した。
(2) CS120の簡便な精製法としてEW135に対する抗体を用いるアフィニティクロマトグラフィー法を開発した。ニワトリ血清を抗EW135-Sepharoseカラムにアプライ後、緩衝液でカラムを洗浄し、酸性の緩衝液（グリシン-塩酸緩衝液）を用いることにより純度の高いCS120が溶出した。CS120はカルシウムイオン存在下黄色ブドウ球菌とプロテインAに結合することが確認された。
(3)インフルエンザウイルスに対するCS120の効果を以下の通り検討した。インフルエンザウイルスとCS120を混合してMDCK細胞に加えて培養し形成するプラーク数を検討したところ、対照群と比較して顕著な減少は見られなかった。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本研究の目的の一つであるCS120の一次構造の解明にはCS120のcDNAを得る必要があるが、設計したプライマーを用いてPCRを行ったところ、予想通りにCS120のcDNAの一部が得られた。これにより、今後のcDNAクローニングの見通しが立ったと言える。また、CS120の簡便な精製法が確立されたことは、今後のCS120の機能解析を進める上で重要な成果である。
|
| 今後の研究の推進方策 |
PCRによりCS120のcDNAの一部が得られたことから、今後は、これをベクターに導入後クローニングを行い全塩基配列を決定する。その後、RACE法等により残りの5’側と3’側の塩基配列を決定して最終的にCS120の一次構造を明らかにする。一方、ニワトリ血清より精製したCS120を用いて抗菌活性等の機能を検討する。
|
| 次年度使用額が生じた理由 |
設備備品費で購入を計画していた機器を購入しなかった為。
|
| 次年度使用額の使用計画 |
ヨーロッパ獣医免疫学会において研究成果を発表する予定であり、その為の費用（外国旅費）と消耗品に使用する。
|
