| 研究課題/領域番号 |
26460087
|
|---|
| 研究機関 | 崇城大学 |
|---|
研究代表者 |
牧瀬 正樹 崇城大学, 薬学部, 准教授 (80433001)
|
|---|
| 研究分担者 |
國安 明彦 崇城大学, 薬学部, 教授 (90241348)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
|
| キーワード | ヌクレオポリン / Nup88 / ビメンチン / がん |
|---|
| 研究実績の概要 |
本年度は主に、Nup88とVimentinとの結合を競合的に阻害するペプチドのスクリーニング並びにそのin vivoおよびin vitroでの効果を評価すること、およびNup88過剰発現細胞の運動性を検討した。阻害ペプチドのスクリーニングに関しては、ペプチドの結合ターゲットとなる上記２因子それぞれの結合ドメインの同定を試み、VimentinのN末端領域がNup88と結合することを見出したものの、Nup88側の結合ドメインに関しては以下の2点技術的な問題により同定できなかった。１）構築した幾つかのNup88 deletion constructの発現量がまちまちであった。２）これらのconstructsの免疫沈降法による沈降効率が悪く、実験の再現性が低かった。次に、細胞の運動性に対するNup88過剰発現の効果を検討したところ、Vimentinを発現しているHeLa細胞のNup88過剰発現株において、有意に運動性を亢進したが、Vimentinを発現していないMCF-7細胞では亢進されないことを見出し、Vimentin依存性を示唆した。一方、次年度に実施予定であったNup88発現応答性遺伝子のスクリーニングを前倒しで行い、がんの発生および悪性化に関わることが報告されている11種類の候補因子を同定したので、定量PCRによる遺伝子発現解析を進めている。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
以下の1に関して解析が遅れているが、２、３については概ね順調に解析できている。
１）技術的な問題により、Nup88とVimentinの相互の結合ドメインを絞りきれていないため、これらのドメインに対して結合する阻害ペプチドのスクリーニングが遅れている。
２）細胞運動性に対するNup88の促進効果がVimentin発現に依存していることを示唆した。
３）次年度に実施予定であったNup88発現に応答して発現変化する幾つかの候補遺伝子を同定し、その遺伝子レベルの発現を既に解析中である。
|
| 今後の研究の推進方策 |
引き続き、免疫沈降法によってNup88のVimentin結合ドメインの同定を進め、結合阻害ペプチドのスクリーニングに持ち込む。Nup88が細胞運動性を促進する分子機序をVimentinの重合・脱重合制御の観点から検討する。加えて、Nup88過剰発現によって誘導されるがん関連遺伝子の発現解析を進める。
|
| 次年度使用額が生じた理由 |
Nup88のVimentin結合ドメインの同定が遅れているため、このドメインに対する阻害ペプチドのスクリーニングが行えなかったから。
|
| 次年度使用額の使用計画 |
Nup88側の結合ドメインの同定、および阻害ペプチドのスクリーニング実験に必要な消耗品の購入などに使用する。
|
