| 研究課題/領域番号 |
26460277
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| 研究機関 | 宮崎大学 |
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研究代表者 |
日野 真一郎 宮崎大学, 医学部, 講師 (00372699)
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| 研究分担者 |
菱川 善隆 宮崎大学, 医学部, 教授 (60304276)
チョウジョウフ ナランツオツク 宮崎大学, 医学部, 助教 (90640962)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 腸管上皮 / 細胞分化 |
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| 研究実績の概要 |
軟骨形成においてWWP2ユビキチンリガーゼは転写因子Sox9と相互作用し、Sox9の核移行を介して2型コラーゲンの転写活性に関与するが、小腸および大腸でのWWP2の発現はこれまで明らかではなかった。マウスの各臓器を用いてWWP2のmRNAの発現をRT-PCRにより確認したところ、小腸と大腸においても発現が認められ、大腸での発現量が小腸よりも高いことが分かった。小腸でのin situ hybridaizationの結果、WWP2のmRNAの局在は、腸陰窩部の基底部やその周囲の上皮で強く発現し、上皮細胞が上部に移動するにしたがって発現の低下が認められた。小腸でのWWP2のタンパク質の局在は、mRNAの局在と同じく陰窩基底部に強くみられ、核内と細胞質内に発現が認められた。大腸では、WWP2のmRNAならびにタンパク質は、陰窩基底部から陰窩壁に広く発現が認められ、粘膜表層の上皮で発現が低下していた。細胞内局在に関しては、小腸と同様に核内と細胞質内に発現が認められた。ヒト大腸がん上皮細胞株Caco-2を用いてSox9の発現をノックダウンさせるとWWP2の発現が抑制されていることから、消化管上皮細胞株においてWWP2の発現がSox9により制御されていることが明らかとなった。マウス消化管上皮でのWWP2発現はSox9の発現パターンと同一であり、 Sox9 がWWP2の発現を制御している可能性が示唆された。WWP2が核内と細胞質内に共に発現し、分化に伴い発現が低下していることから、核内ではSox9の共役分子として、細胞質内ではE3リガーゼとしてタンパク分解に関与することで腸上皮細胞の分化に関与する可能性が推察された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
腸上皮におけるWWP2およびSox9の発現解析においては、計画どおり達成することができた。WWP2とWWP2分解基質の発現変動を解析する目的で、in vivoエレクトロポレーション法を用いて腸管陰窩基底部細胞のSox9ならびにWWP2発現のノックダウンを試みたが、基底部細胞へのsiRNAの導入効率が非常に悪く条件を検討中である。研究計画書の当初計画どおりに進まない時の対応に従って、in vitro細胞組織体培養系を用いて解析を進める。
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| 今後の研究の推進方策 |
in vitro細胞組織体培養系を用いて、Sox9あるいはWWP2のノックダウンを行ったサンプルのマイクロアレイの結果を比較することで標的遺伝子の候補をスクリーニングする。スクリーニングにより得た遺伝子による分化制御を分子生物学的、組織学的解析により明らかにする。
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