| 研究課題/領域番号 |
26460304
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| 研究機関 | 久留米大学 |
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研究代表者 |
村井 恵良 久留米大学, 医学部, 准教授 (40322820)
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| 研究分担者 |
田中 永一郎 久留米大学, 医学部, 教授 (80188284)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 統合失調症 / オキシトシン / シナプス / パッチクランプ法 / 急性単離細胞 |
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| 研究実績の概要 |
本研究はラット前頭前野、腹側被蓋野、及び扁桃体におけるニューロン活動及びモノアミン分泌に対するオキシトシン作用を検討し、オキシトシン（及びその関連物質）の統合失調症新規治療薬及び治療補助薬としての可能性を探ることを目的としている。
現在、正常ラットの前頭前野、腹側被蓋野、及び扁桃体ニューロンを対象として機械的単離ニューロンを対象としたwhole-cellパッチクランプ法を用いてオキシトシンの直接作用 [オキシトシン灌流投与で発生する膜電位（電流）変化]、及びオキシトシンのシナプス電位（電流）に及ぼす作用 [誘起性あるいは自発性興奮性/抑制性シナプス後電位（電流）に対する効果]を検討している。正常ラットの前頭前野、腹側被蓋野、及び扁桃体ニューロン自体に対するオキシトシン投与による膜電位（電流）はほとんど変化がなかったことより、オキシトシンの各ニューロンに対する直接作用はほとんど確認されなかった。各ニューロンにおけるオキシトシンの自発性興奮性/抑制性シナプス後電位（電流）に対する効果を検討した結果、前頭前野ニューロンではオキシトシンによる興奮性シナプス後電位（電流）の増強効果が観察され、腹側被蓋野と扁桃体ニューロンではオキシトシンによる抑制性シナプス後電位（電流）に対する増強効果が観察されている。今後はさらなるデータ数の取得と検証を行うとともに、スライスパッチクランプ法を用いたスライス標本レベルでの検討を行う予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
急性単離ニューロンを用いた実験において、スライス標本から機械的刺激（振動）によって細胞を単離する際に単離ニューロンに付着する樹状突起の長さが短くなる傾向が強かった。そのため、抑制性のGABA作働性シナプスブトンのみが付着している標本からの抑制性シナプス後電流（IPSC）記録は取得できたが、興奮性シナプス後電流（EPSC）記録の効率が低かった。スライス標本のインキューベート時間の延長や機械的振動周波数を低下させるなどの対策を行い、長い樹状突起の付着した単離ニューロン標本作製ができるようになったため、現在はEPSC記録も検討中である。Whole-cellパッチクランプ記録において、細胞内情報伝達過程の関与も考えてニスタチン穿孔パッチクランプ法も併用してデータ検討を行っている。当初、前頭前野ニューロンの単離ニューロン標本モデルとスライス標本レベルでの比較検討を予定していたが、異なる脳部位での応答を検討しており、急性単離細胞レベルでの検討を終えた後はすみやかにスライス標本の記録に取りかかる予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
前頭前野、腹側被蓋野、及び扁桃体を含むスライス標本を対象として、組織中の投射ニューロン及び介在ニューロンを対象にwhole-cellパッチクランプ法あるいは微小ガラス電極法を用いてオキシトシンの直接作用、及びオキシトシンのシナプス電位（電流）に及ぼす作用を明らかにする。統合失調症発現過程の原因の一つとして、前頭前野でのグルタミン酸作働性神経系機能低下によって引き起こされる過程（腹側被蓋野のドーパミン作働性ニューロンの活動低下、及びGABA作働性ニューロンの活動低下が生じることで統合失調症症状が発生する過程）にオキシトシンがどのように作用するのかを検討することは、オキシトシンによる統合失調症症状改善のメカニズムを明らかにする上で重要と考えられる。当研究室では、前頭前野ニューロンにおいてDA/5HT投与によりGABA応答が抑制されることを確認しており、このDA/5HT応答に対するオキシトシン作用にも注目している。最終的には、統合失調症モデルラットを用いて正常群とのオキシトシン作用を比較することで、統合失調症発生過程におけるオキシトシンの作用を解明していきたい。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
H26年度購入予定のビブラトーム（7000smz，ショーシンEM）を当教室研究費（久留米大学）で購入することが可能となり，代わりに老朽化していた試薬測定用の電子天秤（MSU225P, ザルトリウス）を購入したために差額金額が生じた。
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| 次年度使用額の使用計画 |
H27年度使用額は計画どおり実験動物費や試薬等代金として使用する。
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