| 研究課題/領域番号 |
26460460
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| 研究機関 | 東邦大学 |
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研究代表者 |
若山 恵 東邦大学, 医学部, 講師 (40230924)
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| 研究分担者 |
渋谷 和俊 東邦大学, 医学部, 教授 (20196447)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 特発性肺動脈性肺高血圧症 / WNT/PCPパスウェイ / Stachybotrys chartarum |
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| 研究実績の概要 |
特発性肺動脈性肺高血圧症（IPAH）は難治性疾患であり、現在、根本的な治療法が存在せず、ほとんどすべての患者が血管拡張薬による保存的治療や心肺移植に頼っている。本研究の目的は、ヒトIPAH剖検例と、環境由来真菌であるStachybotrys(S) chartarumを経気道的に接種することでIPAH類似の肺動脈壁肥厚を生じたモデルマウスを用いて、病態形成の本幹をなす肺動脈壁の肥厚に直接的・非直接的に関与する遺伝子経路とその発現部位を蛋白レベルで証明し、IPAHの新たな治療法の可能性を追求することである。
平成26年度において、当機関における特発性・二次性を含むヒト肺動脈性肺高血圧症（PAH）剖検例と、年齢を一致させた肺動脈肥厚の無い対照症例の保存肺組織を用いて、肺動脈病変におけるWNT/PCPパスウェイに関わる遺伝子であるWNT-11、DVL-2、DAAM-1の発現の有無や詳細な発現部位について免疫組織学的に評価を行った。加えて、同様の解析をIPAHモデルマウスに対しても行い、これらの群の染色結果について比較検討を行った。
ヒト対照群と二次性PAH群の中膜の平滑筋細胞においてはWNT/PCPパスウェイの上流に位置するDVL-2の陽性率が下流に位置するDAAM-1陽性率に比して高かったのに対して、IPAH群ではDAAM-1の陽性率がDVL-2の陽性率に比して高かった。また、マウスモデルの肺動脈では、肺動脈壁肥厚の有無に関わらず、いずれも陰性であった。
これらのことから、WNT/PCPパスウェイはIPAHの病態である中膜平滑筋層の肥厚に直接的に関与している可能性が示唆された。またIPAHでは、二次性PAHと異なり、DVL-2を介さずDAAM-１を発現させる間接的なパスウェイの関与が示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
WNT/PCPパスウェイ関連遺伝子であるDVL-2やDAAM-1の免疫組織学的検索においては、ヒトIPAH症例の中膜平滑筋層において対照群や二次性PAH群とは異なった発現頻度が得られ、IPAHの病態形成にWNT/PCPパスウェイが関与している可能性が示唆された。一方で、DAAM-1の発現にDVL-2を介さない他のパスウェイの介在の可能性が示唆され、可能性のあるパスウェイを追加検索する必要性が生じている。
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| 今後の研究の推進方策 |
特発性・二次性を含むヒトPAH剖検例と、年齢を一致させた肺動脈肥厚の無い対照症例の保存肺組織を用いて、WNT/PCPパスウェイに直接的および間接的に関与する遺伝子の発現の有無や発現部位について免疫組織学的評価を行い、このパスウェイに関わるどの部分で意図的な介入を加えることが予防や早期治療につながる可能性があるか明らかにする。同様の免疫組織学的検索をマウスモデルについても行うことで、因子介入による中膜平滑筋層の肥厚に寄与するパスウェイや遺伝子について明確にする。
また、マウスモデルにおいてはWNT/PCPパスウェイ関連遺伝子の発現が明確でなかったことから、より上流や下流に位置するパスウェイを検索することにより、二次的にPAHを惹起するパスウェイの存在についてより明確にできると考える。
さらに、S. chartarum等の環境由来真菌の代謝産物である、トリコテセン-マイコトキシンの一種のT2-toxinをマウスに持続摂取させることによって、同様の肺病変が形成されるか否かについて明らかにする。これらにより、IPAHの病変形成のメカニズムに寄与する環境因子の一端を明らかにする。
平成26年度の実績として得られたWNT/PCPパスウェイ関連遺伝子の免疫組織学的評価についてはデータを整理し、雑誌に公開する予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
WNT/PCPパスウェイに関与する遺伝子の発現の有無や発現部位について免疫組織学的に検索することにより得られた結果から、次に検索するパスウェイ関連遺伝子について見直す必要が生じたため、26年度中に施行予定であったRhoA/ROCKパスウェイやTGFβパスウェイに関与する遺伝子の免疫組織学的検索・評価を次年度以降に持ち越したため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
DAAM-1に直接的・間接的に作用する遺伝子や、RhoA/ROCKパスウェイやTGFβパスウェイに関与する遺伝子の免疫組織学的検索に関わる費用。具体的には、パラフィンブロック薄切にかかわる費用、抗体の購入費、発色剤の購入費。
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