研究課題
これまでに複数の膵癌細胞株を出発材料としてジェムシタビン（以後GEMと略記）耐性獲得細胞株を樹立した。これらのうち、２種類（PK-8、PK-9）を出発材料として研究を開始した。PK-8はGEMへの感受性が中等度、PK-9は比較的感受性が高い膵癌細胞株で、これらから樹立したGEM耐性の細胞株はそれぞれRPK-8、RPK-9と命名した。これらの細胞株では、耐性獲得メカニズムが異なっていたため、これらの２細胞株を選択した。RPK-9は細胞内で活性化させるために必須のDCK遺伝子にホモ欠失が見られていて、RPK-8は耐性機序が現時点では不明である。これらの親株と耐性獲得株、合計４株に対し、レンチウイルスベクターを用いて山中４因子を導入すると、リプログラミングされたと考えられるコロニーが複数個得られた。RNAを定量すると、導入した遺伝子の発現上昇に加え、幹細胞マーカーと考えられているNANOGなどの遺伝子の発現も上昇しており、順調にリプログラミングされたことをうかがわせる結果であった。また、GEM耐性株では、GEMへの感受性も変化しているようであった。得られた結果が再現性を示すかどうかを確かめるため、再度、独立してウイルスベクターを導入したところ、やはりリプログラミングされたと考えられるコロニーが複数生育した。現在、これらのリプログラミングされたと考えられる細胞に対し、さらなる解析を進めているところである。
2: おおむね順調に進展している
研究の初年度であるが、４種類の膵癌細胞株に対して、複数回のリプログラミング実験を行うことができ、それぞれに対して形態および遺伝子発現の解析を行い、リプログラミング実験が進んでいることをうかがわせる結果を得ることができた。
リプログラミングの再現性を確認し、遺伝子発現変化、miRNAの発現変化、Teratoma formation assayなどを行う。また、リプログラミング後、分化の方向へと誘導できるかどうかを検討する。
研究は順調に進んだ。ごくわずかな繰り越し額が残ったが、２６年度に使用する消耗品に充当せずに当該年度の研究を行うことができたため、次年度に使用する予定とした。
２７年度に使用するリプログラミング細胞の培養実験に関わる消耗品に充当する予定である。
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