研究課題
本研究ではテトラサイクリンの除去によってB型肝炎ウイルス(HBV)複製を誘導できる細胞株を用いて、HBV複製を抑制する低分子化合物のスクリーニングをおこなった。その結果、細胞毒性を示すことなく培地中HBV DNAを大きく減少させる複数の化合物を同定した。このうち再現よくまた用量依存的に細胞外HBV DNAを減少させた化合物に着目したところ、すでに微小管合成を阻害することが知られているコルヒチンやノコダゾール、ビンブラスチンなどがHBV DNA減少作用を有することが判明した。これらを処理したHBV複製培養細胞においては実際に、線維上の微小管が破壊されていたことより、HBV複製過程に機能的微小管が必要であることが示唆された。また微小管がHBV生活環のどの段階に関わるかを検討したところ、微小管破壊細胞においては細胞外HBV DNAだけではなく、細胞内HBV DNA、キャプシドに内包されるHBV DNA量も同様に減少していた。またこの細胞においてはキャプシドに取り込まれたHBV RNA量も減少させた一方で、HBV coreプロモーター依存的転写活性、細胞内総HBV RNA量、HBV coreタンパク質総発現量には大きな変化がなかった。一方、coreが多量体化したキャプシド量は大きく減少していた。以上のことより、機能的微小管はHBV coreタンパク質の多量体化、それに引き続くHBV RNAのキャプシドへの取り込みおよびHBV DNA産生に役割を果たすことが示唆された。これらの知見は細胞環境を利用したHBV複製機構の一端を示したものであり、今後さらなるメカニズム解析が望まれる。
2: おおむね順調に進展している
今回の結果より機能的微小管がHBV DNA産生過程、特にHBV coreタンパク質多量体化に必要であることが示唆された。これまでcore多量体化およびHBV RNAの取り込みが細胞内のどのような画分で行われているかに関してはほとんど明らかになっていない。本研究結果は、core多量体化／HBV RNA取り込みが微小管上で起こること、あるいはcore多量体化に必要な構成成分が微小管輸送によって供給されることを示唆するものである。本研究結果は国内外の学会ですでに成果発表をおこない、また近々論文作成も予定している。このように本研究は当初の予定通りに順調に研究が進行している。
微小管がHBV core動態と相互作用する機構はいまだ明らかではなく、次年度に解析する予定である。また本年度見られた知見が実際のHBV感染細胞においても認められるかどうか、またHBV遺伝子型によってその制御が異なるかどうかを合わせて検討する。以上の検討により機能的微小管によるHBV複製過程制御の生理的意義およびその一般性に関して考察する。
これまで使用していた実験系に必要な試薬が枯渇し、新たに実験系を構築する必要性が生じた。そのため本検出系に関連する試験およびまとまった試薬の購入を次年度におこない、条件検討および実験系構築後にアッセイをおこなうこととした。
本年度に使用予定で使用しなかった分の研究費は次年度に使用することとし、研究目的達成のため効率的な研究遂行を図る。
すべて 2015 2014
すべて 雑誌論文 (10件) (うち査読あり 7件、 謝辞記載あり 6件) 学会発表 (45件) (うち招待講演 4件)
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