新しい遺伝子発現制御による女性生殖器特異的IFNの局所発現メカニズムの解明

2016 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 26460567
• 研究機関: 弘前大学
• 研究代表者: 松宮 朋穂 弘前大学, 医学研究科, 助教 (30344592)
• 研究分担者: 今泉 忠淳 弘前大学, 医学研究科, 教授 (90232602)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2017-03-31
• キーワード: 免疫学 / インターフェロン / Importin

研究実績の概要

平成28年度は、前年度に質量分析法で同定したimportin 9 (IPO9)との相互作用が考えられた分子との結合能の検証実験を行った。はじめに質量分析法で同定されたタンパク質群の遺伝子の発現をPCR法で確認した。これまでの実験はHeLa細胞で行ってきたので、遺伝子発現の検討もHeLa細胞でおこなった。その結果、いくつかの遺伝子の発現が確認できなかった。我々の検討したHela細胞で遺伝子発現が確認されなかった遺伝子について、遺伝子発現が認められるとされる細胞では遺伝子の増幅が認められたことから、PCRの実験自体に問題はなく、質量分析法の結果が擬陽性であった可能性や、遺伝子のスプライシングによる、等の原因が考えられた。
HeLa細胞で遺伝子発現が確認された分子について、タンパク質をコードする領域全長をPCR法でクローニングし、哺乳細胞発現ベクターに挿入した。次に、タンパク質の発現をウェスタンブロット法で確認した。一部のタンパク質は商品化された抗体の発売がなかったので、タグ付きタンパク質が翻訳される様に挿入遺伝子の末端を設計し直した。これらの遺伝子を挿入した発現ベクターとIPO9発現ベクターをHeLa細胞に同時に導入し、免疫沈降法により、タンパク質相互作用を検討した。その結果、一部の分子は質量分析の結果と同様に共沈が確認され、タンパク質間の相互作用が実験的に検証された。当該研究で解明された相互作用について、引き続き研究を行う。

研究成果

• [雑誌論文] Interferon (IFN)-induced protein 35 (IFI35) negatively regulates IFN-β-phosphorylated STAT1-RIG-I-CXCL10/CCL5 axis in U373MG astrocytoma cells treated with polyinosinic-polycytidylic acid. (2017)
  • 著者名/発表者名: Shirai K, Shimada T, Yoshida H, Hayakari R, Matsumiya T, Tanji K, Murakami M, Tanaka H, Imaizumi T.
  • 雑誌名: Brain Res. 巻: 1658 ページ: 60-67
  • DOI: 10.1016/j.brainres.2017.01.018
  • 査読あり
• [雑誌論文] Non-Canonical Role of IKKα in the Regulation of STAT1 Phosphorylation in Antiviral Signaling. (2016)
  • 著者名/発表者名: Xing F, Matsumiya T, Shiba Y, Hayakari R, Yoshida H, Imaizumi T.
  • 雑誌名: PLoS One. 巻: 11 ページ: e0168696
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0168696
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Critical Role of IRF-3 in the Direct Regulation of dsRNA-Induced Retinoic Acid-Inducible Gene-I (RIG-I) Expression. (2016)
  • 著者名/発表者名: Hayakari R, Matsumiya T, Xing F, Yoshida H, Hayakari M, Imaizumi T.
  • 雑誌名: PLoS One. 巻: 11 ページ: e0163520
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0163520
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Interferon (IFN)-Induced Protein 35 (IFI35), a Type I Interferon-Dependent Transcript, Upregulates Inflammatory Signaling Pathways by Activating Toll-Like Receptor 3 in Human Mesangial Cells. (2016)
  • 著者名/発表者名: Imaizumi T, Yano C, Numata A, Tsugawa K, Hayakari R, Matsumiya T, Yoshida H, Watanabe S, Tsuruga K,
  • 雑誌名: Kidney Blood Press Res. 巻: 41 ページ: 635-42
  • 査読あり