職業性胆管がん発症の原因となる究極発がん物質の究明

2016 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 26460806
• 研究機関: 公益財団法人大原記念労働科学研究所
• 研究代表者: 圓藤 吟史 公益財団法人大原記念労働科学研究所, 研究部, 客員研究員 (20160393)
• 研究分担者: 山中 健三 日本大学, 薬学部, 教授 (50182572) ; 加藤 孝一 日本大学, 薬学部, 教授 (60246931) ; 市原 学 東京理科大学, 薬学部薬学科, 教授 (90252238)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2017-03-31
• キーワード: 胆管がん / 1,2-ジクロロプロパン / ジクロロメタン / ハロゲン化炭化水素 / 化学発がん / グルタチオンS-トランスフェラーゼ / 体細胞突然変異

研究実績の概要

オフセット校正印刷会社労働者にみられた胆管がんは、ハロゲン化炭化水素類の高濃度曝露による業務上疾病とされたが、実験動物では再現されていない。それ故、我々は胆管がんとの因果関係を究明するために、ハロゲン化炭化水素類の代謝経路と発がん過程における活性体の生成を明らかにすることを目的に、細胞障害性、遺伝毒性を検討し、原因物質の追究を試みた。
方法は、ヒト肝腫瘍由来のHepaRG細胞を肝細胞様および胆管上皮様細胞に分化させ薬物代謝酵素群を誘導後、1,2-dichloropropane (DCP)および1,2,3-trichloropropane（TCP）を24時間曝露し、細胞生存性をWST-8法により評価した。TCP処理によるmRNAレベルの変化はDNAチップを用いて調べた。次に、不死化ヒト胆管由来細胞株 (MMNK-1細胞: DMEM＋5% FBS )にTNFα(100ng/mL)に4，6，8，10時間曝露した。曝露終了後、カラム抽出法で細胞からtotal RNAを抽出し、逆転写酵素を用いてcDNA (5 mg)を合成した。このcDNAを使用してリアルタイムPCR法（SYBR法）でNFκB体と細胞超変異とクラススイッチ組み換えに関連する酵素の発現量を測定した。インターナルコントロールとしてβ-Actinを用いた。
TCPの細胞毒性はDCPよりも強い。薬物代謝酵素の誘導は毒性に影響を与えなかった。TCP処理細胞のmRNA解析により、CYPおよびGSTよりもGSH再生系酵素蛋白のmRNA合成が高い。CYPの関与よりもGSHによる代謝活性化が毒性発現機構に深く関与している可能性が示唆された。ヒト胎芽由来胆管細胞を用いた検討では、TNFα処理は体細胞超変異とクラススイッチ組み換えに関連する酵素およびNFκBのmRNAレベルを増加させた。同酵素の胆管細胞変異への関与の可能性が示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] 印刷労働者における1,2-ジクロロプロパン累積曝露量と胆管がん罹患リスクの関係 (2017)
  • 著者名/発表者名: 熊谷信二、圓藤吟史
  • 雑誌名: 労働の科学 巻: 72 ページ: 42-45
  • 査読あり
• [雑誌論文] Relationship between cumulative exposure to 1,2-dichloropropane and incidence risk of cholangiocarcinoma among offset printing workers. (2016)
  • 著者名/発表者名: .Kumagai S, Sobue T, Makiuchi T, Kubo S, Uehara S, Hayashi T, Sato KK, Endo G.
  • 雑誌名: Occup Environ Med. 巻: 73 ページ: 545ー552
  • DOI: 10.1136/oemed-2015-103427.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Investigation of spatial clustering of biliary tract cancer incidence in Osaka, Japan: Neighborhood Effect of a Printing Factory. (2016)
  • 著者名/発表者名: .Ito Y, Nakaya T, Ioka A, Nakayama T, Tsukuma H, Uehara S, Kogawa Sato K, Endo G, Hayashi T.
  • 雑誌名: J Epidemiol. 巻: 26 ページ: 459-463
  • DOI: 10.2188/jea.JE20150116.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Screening and surveillance for occupational cholangiocarcinoma in workers exposed to organic solvents. Surg Today. (2016)
  • 著者名/発表者名: .Kubo S, Takemura S, Tanaka S, Nishioka T, Kinoshita M, Hamano G, Ito T, Yamamoto T, Abue M, Aoki M, Nakagawa K, Hijioka S, Miyamoto A, Osaki Y, Endo G, Kumagai S.
  • 雑誌名: Surg Today. 巻: 46 ページ: 705-712
  • DOI: 10.1007/s00595-015-1229-9.
  • 査読あり
• [雑誌論文] 産業保健の最近の動向と新たな課題. (2016)
  • 著者名/発表者名: 圓藤吟史
  • 雑誌名: 公衆衛生 巻: 80 ページ: 238-242.
  • DOI: http://dx.doi.org/10.11477/mf.1401208396
• [学会発表] 1,2-ジクロロプロパンのヒト胆管細胞への曝露による遺伝子改編酵素AIDのmRNA発現上昇 (2017)
  • 著者名/発表者名: 木村 優介，高巣 成惟，櫻井 敏博，市原 佐保子，圓藤 陽子，圓藤 吟史，市原 学.
  • 学会等名: 第87回日本衛生学会学術総会
  • 発表場所: 宮崎市
  • 年月日: 2017-03-26 – 2017-03-28
  • 国際学会
• [学会発表] ジクロロプロパン曝露マウスの胆管細胞増殖と肝臓毒性におけるP450の役割. (2017)
  • 著者名/発表者名: 張 驍, 宗 才，張 霊逸，エドウィン ガーナー， 黄 晉彦，呉 文亭，常 杰，桜井 敏博, 市原 佐保子, 市原 学
  • 学会等名: 第87回日本衛生学会学術総会
  • 発表場所: 宮崎市
  • 年月日: 2017-03-26 – 2017-03-28
• [学会発表] Exposure To 1,2-dichloropropane Enhances mRNA Expression Of Activation-induced Cytidine Deaminase In Human Cholangiocytes. (2017)
  • 著者名/発表者名: Takasu S, Sakurai T, Kimura Y, Ichihara S, Endo Y, Endo G, and Ichihara G.
  • 学会等名: Society of Toxicology 56th Annual Meeting (SOT2017).
  • 発表場所: ボルチモア、米国
  • 年月日: 2017-03-12 – 2017-03-16
  • 国際学会
• [学会発表] ジクロロプロパンへの曝露はヒト胆管細胞において活性化誘導シチジンデアミナーゼ発現を誘導する. (2017)
  • 著者名/発表者名: 市原 学、近藤直登、木村雄介、高巣成惟、櫻井敏博、市原佐保子、圓藤陽子、圓藤吟史
  • 学会等名: 第16回分子予防環境医学研究会
  • 発表場所: 熊本市
  • 年月日: 2017-02-03 – 2017-02-04
• [学会発表] 産業中毒の原因解明と予防のための症例・疫学・実験研究－科学の本質の一つである予見性を産業医学でどのように獲得するか. (2016)
  • 著者名/発表者名: 市原 学
  • 学会等名: 第26回日本産業衛生学会全国協議会
  • 発表場所: 京都市
  • 年月日: 2016-09-08 – 2016-09-10
  • 招待講演
• [学会発表] Role of P450 in Hepatotoxicity and Proliferation in Bile Duct Induced by Exposure to 1,2-Dichloropropane in Mice. (2016)
  • 著者名/発表者名: Zhang X, Zong C, Zhang L, Garner E, Huang C, Wu W, Chang J, Sakurai T, Ichihara S, Ichihara G.
  • 学会等名: 第44回産業中毒・生物学的モニタリング研究会(日本産業衛生学会)
  • 発表場所: 東京都
  • 年月日: 2016-08-04 – 2016-08-05
• [学会発表] 1,2-ジクロロプロパン暴露マウスの肝毒性と胆管細胞の増殖におけるP450の役割. (2016)
  • 著者名/発表者名: 張 驍, Cai ZONG, Lingyi ZHANG, Edwin GARNER, Chinyen HUANG, Wenting WU, Jie CHANG, 桜井 敏博, 市原 佐保子, 市原 学.
  • 学会等名: 第43回日本毒性学会学術年会
  • 発表場所: 名古屋市
  • 年月日: 2016-06-29 – 2016-07-01
• [学会発表] Epidemiological and Toxicological Studies on the Carcinogenicity of 1,2-dichloropropane. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ichihara G
  • 学会等名: ICCA-LRI and NIHS Workshop
  • 発表場所: 淡路市
  • 年月日: 2016-06-15 – 2016-06-16
  • 国際学会
• [学会発表] オフセット印刷労働者におけるジクロロプロパン累積曝露量と胆管癌罹患リスク． (2016)
  • 著者名/発表者名: 熊谷信二、祖父江友孝、久保正二、林朝茂、佐藤恭子、上原新一郎、圓藤吟史．
  • 学会等名: 第89回日本産業衛生学会
  • 発表場所: 福島市
  • 年月日: 2016-05-24 – 2016-05-27
• [備考] 研究室メンバー - 日本大学薬学部環境衛生学
  • URL: environmental-toxicology.pha.nihon-u.ac.jp/member.html
• [備考] 東京理科大学 市原学教授
  • URL: https://www.tus.ac.jp/fac_grad/p/index.php?6971