| 研究課題/領域番号 |
26460811
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| 研究機関 | 日本医科大学 |
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研究代表者 |
李 卿 日本医科大学, 医学部, 准教授 (50250048)
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| 研究分担者 |
川田 智之 日本医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (00224791)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | カーバメイト系農薬 / アポトーシス / NK細胞 / T細胞 / Thiram / Ziram / Maneb / Carbarylである。 |
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| 研究実績の概要 |
【研究目的】平成26年度はカーバメイト系農薬による抗癌免疫機能への影響を究明するために、まずカーバメイト系農薬による抗癌免疫細胞アポトーシスについて検討した。
【研究実施計画】免疫細胞はヒトNK及びT細胞を用いた。NK細胞はNK-92CI細胞を使用し、T細胞はJurkat T細胞を使用した。アポトーシスの測定は以下の方法を用いた。①膜の変化：本研究はFITC-Annexin Vを用いてカーバメイト系農薬による早期アポトーシス細胞を検出した。②ミトコンドリアからCytochrome-Cの放出：アポトーシスではミトコンドリアからCytochrome-Cが放出されるため、FITC-cytochrome-C抗体を用いてCytochrome-Cの放出を測定した。③活性化Caspase-3の測定：本研究ではFITC標識抗活性化Caspase-3モノクローナル抗体を用いてFACS (Flow Cytometry)法でカーバメイト系農薬による細胞内活性化Caspase-3への影響を測定した。さらに活性化Caspase-3の特異的阻害剤Z-DEVD-FMKを用いて活性化Caspase-3の関与を検証した。
【結果と考察】①Thiram はZiramと同様に用量・処理時間に依存してNK－92CI及びJurkat T細胞死を誘導することが明らかとなった。Manebと Carbarylは高濃度で細胞死を誘導する。各農薬の強さの順位はThiram＞Ziram＞Maneb＞Carbarylである。②ThiramはZiramと同様に用量に依存してNK－92CI及びJurkat T細胞内活性化Caspase-3のレベルを上昇させた。さらにCaspase阻害剤が有意にThiramによるアポトーシスを予防できることから、この細胞死は細胞内のCaspase活性化を介して誘導したことが判明した。③ThiramはZiramと同様に用量に依存してNK－92CI及びJurkat T細胞ミトコンドリアからCytochrome-Cを遊離させることから、この細胞死は、mitochondria pathwayをも介して誘導したことが判明した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
平成26年度は当初の計画通り、カーバメイト系農薬による抗癌免疫機能への影響を究明するために、まずカーバメイト系農薬による抗癌免疫細胞死（アポトーシス）について検討した。仮説通りカーバメイト系農薬による抗癌免疫細胞（NK細胞とT細胞）のアポトーシスを誘導することが明らかとなった。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成27年度はThiram, Maneb及びCarbarylによるPerforin/Granzyme/Granulysin 系への影響を検討し、カーバメイト系農薬によるNK及びLAK活性への影響の機序を明らかにする。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
今年度、予定していた予算について、細胞株などの消耗品が思った以上にコストがかからず、未使用金が発生したため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
繰り越した分については、細胞株などの消耗品に充てる予定である。
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