| 研究課題/領域番号 |
26460890
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| 研究機関 | 日本大学 |
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研究代表者 |
丸山 澄 日本大学, 歯学部, 助教 (30366190)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 個人識別 / 混合試料 / ミトコンドリアDNA型 / 常染色体STR型 / Y-STR型 / 鑑定方法 |
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| 研究実績の概要 |
法医学領域では非常に微量な試料からのDNA型検査が求められる。そこで顕微鏡下にて細胞1～10個を採取し、微量なDNAからの個人識別法の確立を目的とした。採取した細胞をWGA法でDNA増幅し、ミトコンドリアDNA (mtDNA)、常染色体およびY染色体のSTR多型解析を行った。
1. 顕微鏡下における浮遊細胞のトランスファー技術は取得されたと思われる。
2. トランスファー細胞を直接、4種類のWGA法のキット(REPLI-g Single Cell Kit, illustra GenomiPhi DNA Amplification Kit, GenomePlex® Single Cell Whole Genome Amplification Kit, GenomePlex® Complete Whole Genome Amplification (WGA) Kit)を用いてDNAを増幅しDNA型検査を行った。
3. 常染色体およびY染色体STR型判定では細胞が5個以下では判定が困難な結果が出ており、10個の細胞においてもすべてのlocusが検出されたわけではなかった。今回用いた4種類のキットによる差は認められないが，使用した4種類のキットは1細胞を増幅させるSingle Cell kitと抽出したDNAを増幅させるキットについて試みたが、いずれの用途のキットも利用可能であることが示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
当初の目的のうちトランスファー装置による細胞の採取は習得出来たが、混合試料からの識別には至っていない。これは混合試料からの識別の前に、4種類のWGA法キットを用いたDNA増幅による検査を試みているため、当初の予定よりやや遅れている。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成26年度に引き続き、トランスファー細胞からDNA増幅を行い、DNAの型判定を試みる。
新たに導入したWGAキットを用い、微量なDNAを増幅することで、法医学試料に重要な試料の保存および再検査等が可能であることも確認する。
また、常染色体のSTR多型およびY染色体のSTR多型検査は、細胞が極微量な場合では型判定が困難な状況であり、個人の識別が判定可能な最低限の数を検討する。
研究が進んだ段階での研究成果の発表を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
WGA法のためのキットを新たに購入したが、キット、試薬および消耗品をキャンペーンなどを利用し、当初の金額より低く抑えられたため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
本研究において、増幅キットおよびDNA型検査などの試薬類に経費がかかるため、引き続きそれらの購入にあてる予定である。
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