研究課題
最近のゲノム研究の進展により，転写されたRNAの多くがタンパクに翻訳されないmiRNAを含む非コードRNA (non-coding RNA, ncRNA)であることが明らかになった．本研究では，最も高頻度に遺伝子変異が検出されているがん抑制遺伝子p53，およびそのファミリーによって制御される非コードRNAを同定し，機能解析へと展開する．さらに発現異常，遺伝子変異の有無，悪性度および治療効果との関連性を分析することで，胃癌，食道癌を中心とした消化管癌の新しい診断・治療予測システムを開発しようとするものである．平成26年度において以下の研究成果を上げた．1）miR-200ファミリーを介するp53によるCRKLの発現調節とがん進展における役割p53誘導性miRNA，miR-200b/200c/429の新規標的遺伝子CRKL (v-crk sarcoma virus CT10 oncogene homolog-like)を同定した．CRKL遺伝子の3’-UTRにmiR-200b/200c/429の結合配列を同定し，p53ファミリーが，この配列を介してCRKLの発現を抑制していることを明らかにした．臨床検体の解析から，CRKL遺伝子発現が予後不良と相関することをつきとめた．また，p53変異のある症例で有意にCRKLが発現上昇していた．CRKLの導入により，胃癌細胞株の増殖，浸潤，遊走能が上昇することを明らかにした．2）p53に制御される新規機能性RNAの同定miRNAマイクロアレイ，およびp53結合コンセンサス配列の全ゲノム網羅的解析より，19のp53誘導性miRNA候補を同定した．それらすべてについて，real-time RT-PCR法によりp53ファミリーによる発現誘導を確認したところ，14miRNAの強い転写誘導が認められた．
2: おおむね順調に進展している
miR-200ファミリーを介するp53によるCRKLの発現調節とがん進展における役割については，順調に解析が進み，タイトル「The CRKL oncogene is downregulated by p53 through miR-200s」として英文学術雑誌に投稿し，現在major revise中である．さらにp53誘導性miRNAの新規候補のいくつかについては，in silicoでの標的遺伝子の検索を行い，その発現解析に着手している．
p53ファミリーに制御されるmiRNA, ncRNAとその標的遺伝子はがん組織で発現が変化している可能性があり，予後，治療効果などと相関していることが推測される．研究は順調に進展しているので，これらの機能解析，発現解析を行い，バイオマーカーとしての有用性の検討を行う予定である．
平成26年度は順調に研究が進展したため，研究補助に対する人件費，謝金を必要としなかった．さらにp53ファミリーによって調節される標的分子の発現解析に必要な抗体，miRNA, ncRNAの発現解析に必要なプライマー，プローブは既存のものを使用できたため，直接経費の節約が可能であり，残額が生じた．次年度はp53ファミリーに制御される新規の非コードRNAとその標的分子の機能解析に随時着手する予定であり，その研究進展に活用したいと考える．
miRNAマイクロアレイ，およびp53結合コンセンサス配列の全ゲノム網羅的解析より，19のp53誘導性miRNA候補を同定した．それらすべてについて，real-time RT-PCR法によりp53ファミリーによる発現誘導を確認したところ，14miRNAの強い転写誘導が認められた．p53誘導性lincRNAも複数同定しており，それらの標的遺伝子の同定，細胞レベル，がん症例（胃癌，食道癌）での発現解析を進めていく計画である．また，CRKLに関する論文の採択が見込まれ，論文印刷費が生じる．次年度の研究費の使用計画発現解析のための試薬類（酵素類30万円，RNAプローブ20万円，リアルタイムPCR試薬30万円，抗体20万円），細胞培養器具・試薬20万円，学会発表旅費20万円，謝金30万円，論文印刷費10万円
すべて 2014
すべて 雑誌論文 (4件) (うち査読あり 4件、 オープンアクセス 3件) 学会発表 (8件) (うち招待講演 1件)
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