研究課題
B型肝炎ウイルス(HBV)持続感染者は国内で130~150万人と推定されており、感染を放置すれば慢性肝炎、肝硬変、肝がんへと進行するおそれがある。HBV持続感染では、cccDNAと呼ばれる環状ウイルスDNAが、宿主細胞の核内に維持されウイルス複製の鋳型となる。cccDNAを除去する有効な治療法は無く、B型肝炎の根治が難しい理由となっているが、これまで解析系が十分でなかったために、cccDNAを標的とする分子機構の知見が少ない。本研究では、HBV cccDNAに作用し遺伝情報を改変すると考えられる宿主因子AID/APOBEC蛋白質の分子機構とその役割について解析を行い、B型肝炎克服への手がかりを得ることを目指している。本年度はTet-offプロモーター制御下でHBVが産生される培養細胞株を用いた解析を中心に行った。これにより実験開始時までに持ち込まれるcccDNA量を抑えることができるので、よりcccDNA解析に優れ、またtet存在下でcccDNA由来ウイルス複製能の解析が可能になる。解析の結果、細胞株へのIFNγによりAPOBEC3Gが発現上昇しcccDNAへの変異頻度が増加すること、UNGの阻害によってそれが増強されることが確認された。この条件の下さらにtet存在下での培養を続けると、cccDNA変異頻度の上昇と相関してウイルス産生量の減少が見られた。このことからcccDNA変異導入によるウイルス複製能阻害効果が示唆された。
2: おおむね順調に進展している
本研究のターゲットはHBV cccDNAに対する宿主因子の作用である。当該年度からのHBV産生量をコントロールできるtet-off系の導入によって、実験開始前までに作られるcccDNAの影響を排除でき、またtransgene由来のHBV産生を抑えることで、cccDNA由来のウイルス複製をより高精度に解析できたと考える。
これまでの予測通り、cccDNAへの変異導入が高頻度に観察されたので、次世代シーケンサーを用いてより詳細な解析を行う。
次年度に使用することが効率的であると考えたため。
消耗品購入等にあてる。
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すべて 雑誌論文 (2件) (うち国際共著 2件、 査読あり 2件、 オープンアクセス 2件、 謝辞記載あり 2件) 学会発表 (1件) 備考 (1件)
PLoS Pathog
巻: 11 ページ: e1004780
10.1371/journal.ppat.1004780
Virology
巻: 485 ページ: 460-466
10.1016/j.virol.2015.08.017
http://molgenet.w3.kanazawa-u.ac.jp/wordpress/