研究課題
本研究では肝細胞癌の可塑性について、特に癌幹細胞の維持制御機構と微小環境を構成する細胞との関連について検討を行う。平成26年度では、肝癌培養細胞株Huh7細胞と線維芽細胞WI-38との共培養システムを用いて検討を行い、EpCAM陽性肝がん幹細胞分画が共培養によって増加することを同定した。この癌幹細胞分画の増加は星細胞株であるLX2や血管内皮細胞株であるHUVECとの共培養では認められなかった。そこで、WI-38、LX2、HUVECにおいて発現しているサイトカインをqRT-PCRを用いて検討したところ、WI-38で高いTGF-betaの発現が認められた。そこで、TGF-betaを培地に添加したHuh7細胞をコントロールと比較したところ、EpCAM陽性細胞分画の増加が認められ、かつTGF-betaに対する中和抗体でその効果を抑制することが可能であった。さらに、Huh7細胞にpZS-Green-EpCAM promoterプラスミドを組み込み、WI-38と共培養しタイムラプスイメージングを行ったところ、共培養によりEpCAM promoter活性の増強が認められ、WI-38との共培養によりHuh7細胞のEpCAM陽性細胞への脱分化が起こっている可能性が示唆された。
2: おおむね順調に進展している
肝癌幹細胞の脱分化が微小環境細胞によって制御されている可能性がin vitroの系で認められており、当初の研究計画どおりの結果が得られている。ただし、マウスを用いたin vivoでの系は現在進行中であり、特に微小環境細胞が遠隔転移にどのような影響を与えるかに関しては、27年度に成果が出る予定である。
計画は順調に進んでおり、平成27年度はマウスにおける癌幹細胞の遠隔転移能力の獲得過程の検討に加え、エピジェネティックメモリーの制御に関わるKDM2Bの癌幹細胞における発現、微小環境細胞との相互作用との関連について、研究計画どおりに解析検討を行う予定である。
マウス実験の一部を翌年度以降に持ち越しており、一部次年度使用額が生じた。
平成27年度にはマウス実験を行い使用予定である。
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Hepatology
巻: 60 ページ: 1674-1685
10.1002/hep.27093
