| 研究課題/領域番号 |
26461116
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| 研究機関 | 東京慈恵会医科大学 |
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研究代表者 |
吉田 博 東京慈恵会医科大学, 医学部, 教授 (30333529)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | コレステロール引く抜き能 / アクセプターの最適化 / アスタキサンチン / ＨＤＬコレステロール |
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| 研究実績の概要 |
安定同位体（ＳＩ）を用いてＲＡＷマクロファージからコレステロールを引く抜くＨＤＬの機能（HDL C-efflux）のアッセイ系の確立を次のように行った。細胞培養条件の設定、ＳＩ標識コレステロールの細胞内取り込み条件の設定、コレステロール引き抜き条件の設定、抽出条件の設定、測定条件の設定の順に、研究を推進した。
培養液はＲＰＭＩとＤＭＥＭで検討した結果、ＤＭＥＭが優れていることが示された。培養プレートは4種類を比較検討したところ、コーニング3526が優れていることが確認された。継代手法にはトリプシンを使用しない方が望ましいことが判明した。ＳＩ標識コレステロールの溶解液を3種類検討した結果、エタノールが優れていた。細胞からのコレステロール抽出法はＦｏｌｃｈ法と市販既製品試薬を比較したとこころ明らかな差がなく、Ｆｏｌｃｈ法を選択した。内部標準による補正おようびピペットの最適化により、同時再現性が向上した。しかしながら、比較コントロールとして考えているシクロデキストリン（CD）によるコレステロール引抜き量がが予想より低いことから、その原因を検索している。併せて、ＣＤ以外のアクセプター（アポ蛋白Ｂ除去血清）も検討しているところである。また、ＲＡＷ細胞以外のマクロファージ系の細胞株（Ｊ７７４及びＴＨＰ－１）の検討も進めた。
その他として、アスタキサンチンによるＨＤＬ－Ｃ増加効果とHDL C-effluxの関連性について、共同研究者とともに論文化した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
ＳＩ標識コレステロールを用いたＨＤＬ等のアクセプターによる細胞内コレステロール引き抜き能を評価するアッセイ系の最適化に難渋しており、そのために進捗が遅れている。
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| 今後の研究の推進方策 |
27年度末の段階でアッセイ法の最適化に一定の目途がついたところであり、これからの進捗が期待される。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
ＳＩ標識コレステロール引き抜き能を評価するアッセイ法の最適化に多くの時間を要したため研究の進みが滞っていたためである。
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| 次年度使用額の使用計画 |
平成27年度末の時期になって、ようやくアッセイ法の最適化に目途がつく状況になったので、本アッセイ法を活用して、研究を進めることができる。
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