研究課題
GST-Foxp3リコンビナント蛋白とMst1リコンビナント蛋白を用いたin vitroキナーゼアッセイと質量分析法により、Mst1によるFoxp3の有力なリン酸化部位の候補（以降”Foxp3-pX”とする）を見いだした。HEK293細胞にGFP-Foxp3プラスミドを遺伝子導入し、shRNA-Mst1の共導入を行った群と行っていない群との間で、Mst1によるFoxp3のリン酸化について評価を行った。上述した方法で作成したMst1によるFoxp3のリン酸化部位Foxp3-pXを特異的に認識するリン酸化抗体を用いてウェスタンブロティング法を施行したところ、GFP-Foxp3プラスミドを遺伝子導入したHEK293細胞では、内在性のMst1依存性にFoxp3-pXのバンドの発現増加が認められた。マウス野生型Foxp3、Foxp3-pXのA-変異体およびE-変異体のレンチウイルスを作成した。これら野生型ならびに変異体のFoxp3レンチウイルスをJurkat細胞に感染させて擬似制御性T細胞を作成した。野生型Foxp3を導入したJurkat細胞ではMst1依存性にIL-2転写活性が抑制された。A-変異体Foxp3を導入したJurkat細胞ではMst1の有無にかかわらずIL-2転写活性が抑制されなかった一方で、E-変異体Foxp3を導入したJurkat細胞ではMst1の有無にかかわらず恒常的にIL-2転写活性が抑制されていた。Mst1/Mst2-floxedマウスおよびYFP-Cre Foxp3ノックインマウスを交配して制御性T細胞特異的Mst1欠損マウスを作成した。また、CRISPR/Cas9法にてFoxp3-pXDノックインマウスも作成した。今後は、これらのマウスを用いて実験的自己免疫性心筋炎マウスモデルを作成し、表現型を検討する予定である。
すべて 2017 2016
すべて 雑誌論文 (5件) (うち国際共著 3件、 査読あり 5件、 謝辞記載あり 2件、 オープンアクセス 1件) 学会発表 (6件) (うち国際学会 2件、 招待講演 2件)
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