| 研究課題/領域番号 |
26461234
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| 研究機関 | 熊本大学 |
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研究代表者 |
柿添 豊 熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 助教 (70583037)
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| 研究分担者 |
北村 健一郎 山梨大学, 総合研究部, 教授 (10304990) [辞退]
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | セリンプロテアーゼ / プロスタシン / アルドステロン / 食塩 / HAI-1 |
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| 研究実績の概要 |
Pax8-rtTA/LC-1ダブルトランスジェニックマウスとプロスタシン(Prss8) floxマウス、HAI-Pax8-rtTA/LC-1ダブルトランスジェニックマウスとプロスタシン(Prss8) floxマウス、HAI-1 floxマウスを交配し、Pax8-rtTA/LC-1/Prss8flox/floxおよびPax8-rtTA/LC-1/ HAI-1flox/floxマウスを作成し、doxicycline投与によりプロスタシンもしくはHAI-1の尿細管特異的 KOマウス (TKO) を作成した。
これまでにプロスタシンTKOマウスでは当初の予想に反して通常飼育、アルドステロン＋食塩負荷により、コントロールマウスとの比較において血清、尿の電解質排泄や腎の糸球体、尿細管間質障害において差を認めなかった。近位尿細管のプロスタシンの腎間質線維化における役割を調べるため、一側尿管結紮術(UUO)モデルを作製したが、腎間質線維化の程度や線維化マーカーの発現はコントロールとTKOで差を認めなかった。次にプロスタシンの急性尿細管傷害に対する作用を検討するため、シスプラチンを投与し、急性尿細管壊死を誘導した。シスプラチン投与により組織学的な尿細管壊死、血清BUN、クレアチニンの上昇を認めたが、この系においてもコントロールとTKOで差を認めなかった。さらにHAI-1 TKOでも同様にシスプラチン腎症モデルを作製したが、コントロールとTKOで腎障害に差を認めなかった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
熊本地震の影響で実験室が立ち退きの被害を受け、一時動物実験が中断せざるを得なかった。Pax8-rtTA/LC-1/Prss8flox/floxおよびPax8-rtTA/LC-1/ HAI-1flox/floxマウス交配も中断したため、十分な数のマウスを得るのに時間がかかった。
プロスタシンやHAI-1は皮膚、大腸等の上皮の障害において重要な役割を果たしていることが報告されているが、尿細管特異的KOマウスでは表現型を見いだせなかった。セリンプロテアーゼはカスケードを形成して順に活性化される特徴と有しており、単独欠損では他のプロテアーゼが代償的に働き機能が見いだせない可能性がある。
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| 今後の研究の推進方策 |
これまでプロスタシンやHAI-1の尿細管特異的単独欠損では表現型を認めていないが、プロスタシンとHAI-1が相互に作用している報告もあり、現在尿細管特異的ダブルノックアウトマウスを作成中であるため、このマウスの解析に使用する予定である。
また上記のように単独欠損では他のプロテアーゼの代償により機能がマスクされる可能性があるため、floxマウスが入手可能であれば、プロスタシンの活性化因子であるマトリプターゼやヘプシンとのダブルTKOを作成する。Floxマウスの入手が難しい場合、特異的阻害薬投与を検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
熊本地震の影響で実験室が立ち退きの被害を受け、一時動物実験が中断せざるを得なかった。Pax8-rtTA/LC-1/Prss8flox/floxおよびPax8-rtTA/LC-1/ HAI-1flox/floxマウス交配も中断したため、十分な数のマウスを得るのに時間がかかった。また動物実験のサンプルや試薬等の喪失も発生した。
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| 次年度使用額の使用計画 |
これまでプロスタシンやHAI-1の尿細管特異的単独欠損では表現型を認めていないが、他のプロテアーゼが代償的に働き機能が見いだせない可能性がある。また、プロスタシンとHAI-1が相互に作用している報告もあり、現在尿細管特異的ダブルノックアウトマウスを作成中であるため、このマウスの解析に使用する予定である。
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