| 研究課題/領域番号 |
26461241
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| 研究機関 | 東京慈恵会医科大学 |
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研究代表者 |
宮崎 陽一 東京慈恵会医科大学, 医学部, 准教授 (60266690)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | podocyte / ボーマン嚢上皮細胞 / ＢＭＰ |
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| 研究実績の概要 |
平成26年度は、ボーマン嚢上皮細胞 (parietal epithelial cells, PECs) 特異的に発現をdriveするreverse tetracycline-controlled transcriptional activator (rtTA) vectorを構築した。PECs特異的promoterとして、既知の~3kb human podocalyxin 5’flanking regionとそれに続く~0.3 kb rabbit podocalyxin 5’-untranslated regionをcloningし、これをrtTA遺伝子に連結し、発現ベクター (pPEC-rtTA) を構築した。このベクターをrtTAのresponsive elementであるTetO-lacZ発現ベクターとともに株化PECにtransfectionしたところ、doxycyclin存在下でのみlacZの発現が認められた。現在、当該pPEC-rtTAを受託にてマウス受精卵に注入、Founder miceを作成中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
当初の研究計画より若干遅れている。他施設で既に作成済のpPEC-rtTAのtransgenic miceあるいはそのexpression cassetteを入手することが可能であったならば、今年度の研究達成度は大きく違ったと考えられる。確立されたpPEC-rtTA transgenic miceの入手はきわめて重要であるため、引き続き供与依頼を続けていく。
一方、前年度までに得られた成体Podocine-rtTA; TetO-Nogginに対してDoxを投与することにより、ボーマン嚢の一部にpodocyteの形質を認める細胞を認めた。このことから胎児期同様、成体においてもBMPシグナルの遮断がparietal podocyteの出現に寄与することを見出した。
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| 今後の研究の推進方策 |
dominant-negative (dn) BMP type II receptor (dnBMPR-II)(BMPシグナルの阻害)のtransgenic miceに関しては、千葉大および申請者の留学先であるVanderbilt大学が保有、BMPR-IIのloxPマウスも既に作成済みであり当該3系統のマウスについても供与依頼に努めていく。この供与の可あるいは不可が、今後の研究の達成度に大きな影響を及ぼすと予想される。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
transgenic mice作成のためのexpression cassetteの構築に時間を要し、受精卵への注入まで（受託予定）至らず、この費用が本年度未使用分となった。
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| 次年度使用額の使用計画 |
上記injection費用は70万程度（輸送費込み）であり、現在受託中である。
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