| 研究課題/領域番号 |
26461367
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| 研究機関 | 埼玉医科大学 |
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研究代表者 |
井上 郁夫 埼玉医科大学, 医学部, 准教授 (60232526)
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| 研究分担者 |
中野 貴成 埼玉医科大学, 医学部, 講師 (20406474)
竹中 康浩 埼玉医科大学, 医学部, 研究員 (20586789)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | PPARgamma / 転写因子 / 選択的スプライシングバリアント / CRISPR-Cas9システム / ノックアウトマウス |
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| 研究実績の概要 |
PPARgammaは哺乳類においていくつかの選択的スプライシングバリアントが存在することが知られ、マウスとヒトでそれぞれ報告されていて、異なるプロモーターで、それらの発現が厳格に制御されている。マウスPPARgammaには、ヒトと同様に、今までPPARgamma1およびPPARgamma2、以上2つのアイソフォーム(選択的スプライシングバリアント)が知られている。PPARgamma1の発現はエクソンA１から転写され、多くの組織でユビキタスにみられ、脂肪細胞分化誘導に関わらないと言われている。一方、PPARgamma2はエクソンBから転写され、脂肪組織に特異的に発現しており主に脂肪細胞分化誘導に関わる、とされている。我々は、以前から報告されたPPARgamma1と異なるプロモーターであるエクソンＣから転写される、新規なスプライシングバリアントを発見し、これが、PPARgamma2と同様に脂肪細胞分化誘導に関わることを証明し、この部位の特異的なノックアウトマウスを構築し、小人マウスであることを証明してきた。今後、PPARgamma1特異的なノックアウトマウスも新たに構築し、我々が発見しすでに構築した、新たな脂肪細胞分化誘導に関わるエクソンＣノックアウトマウスと比較検討する。
さらに、上記と並行して、CRISPR-Cas9システムを用いて、vitroで、エクソンA１を特異的に切断する場合と、エクソンＣを特異的に切断する場合、それぞれの、脂肪細胞分化誘導も比較検討する。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
以前から報告されたPPARgamma1と異なるプロモーターであるエクソンＣから転写される、新規なスプライシングバリアントを発見し、これが、PPARgamma2と同様に脂肪細胞分化誘導に関わることを証明し、この部位の特異的なノックアウトマウスを構築し、小人マウスであることを証明してきた。しかしながら、以前から報告されたPPARgamma1のプロモーターであるエクソンA１の特異的ノックアウトマウスも構築し、エクソンＣノックアウトマウスと比較検討する必要との指摘があった。
そこで、エクソンＣノックアウトマウスと同様に、エクソンA１ノックアウトマウスを、新たに構築する。
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| 今後の研究の推進方策 |
現在、エクソンA1floxマウス作成が終了しているので、エクソンA１のみを欠損したノックアウトマウスの作成を試み、比較検討を進める。
さらに、上記と並行して、CRISPR-Cas9システムを用いて、vitroで、エクソンA１を特異的に切断する場合と、エクソンＣを特異的に切断する場合、それぞれの、脂肪細胞分化誘導も比較検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
新たなノックアウトマウス構築のため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
exonA1floxマウス作成が終了しているので、エクソンA１のみを欠損したノックアウトマウスの作成を試みる。
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