| 研究課題/領域番号 |
26461403
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
加藤 恒 大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (20705214)
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| 研究分担者 |
柏木 浩和 大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (10432535)
冨山 佳昭 大阪大学, 医学部附属病院, 准教授 (80252667)
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| 研究期間 (年度) |
2014-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 血小板 / インテグリン活性化 / 血栓 / inside-outシグナル |
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| 研究実績の概要 |
今年度は昨年に引き続き巨核球系細胞株CMK細胞システム、ヒト・マウス血小板を用いた血小板活性化機能の詳細、特にフィブリノゲン受容体インテグリンαIIbβ3活性化機序を明らかとするための研究を行っている。本研究の成果により血小板機能のコントロールの改善が期待され、心筋梗塞・脳卒中などの動脈血栓性疾患の発症予防に大きく貢献することが期待できる。
まず血小板RNAから樹立したcDNAライブラリーを作製、エレクトロポレーションによりCMK細胞へ導入しアゴニスト刺激後のαIIbβ3活性化状態に変化の現れたクローンをソーティングで採取し、重要と思われる候補分子を見出している。候補分子については血小板活性化過程におけるその意義についての検討を行うとともに、引き続き様々な活性化誘導刺激において重要な分子の検索を行っている。
またヒト血小板での活性化解析ではαIIbβ3活性化の時間経過が生体内での止血機能に重要であること、CalDAG-GEFIがαIIbβ3の活性化早期に必須の分子であることを明らかとし,第25回国際血栓止血学会での口演発表、第77回日本血液学会学術集会での口演発表によりその成果を報告している。
また、血小板機能異常症例に由来する変異を持つαIIb-R995W変異マウスを用いた血小板機能解析ではin vitro、in vivoでの血小板活性化の評価を行い,その成果を第37回日本血栓止血学会学術集会にて報告している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
血小板インテグリンαIIbβ3活性化状態と時間経過の関係について新たな知見を見出し、その成果の報告が行えており、CMK細胞システムによる重要分子での成果も明らかになりつつあるため。
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| 今後の研究の推進方策 |
CMK細胞システムでαIIbβ3活性化に重要と思われる候補分子について、細胞株を用いた遺伝子導入、ノックダウンなどの実験によりその重要性の確認を行うとともにそのシグナルの詳細について検討を進めて行く。
インテグリンαIIb-R99W変異ノックインマウスではホモマウスでインテグリンの発現量が低下しており,引き続き活性化状態の詳細を検討するとともに血小板表面への発現に影響する機序も含め検討を行う予定である。
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