β1-tubulin異常症の分子病態解明

2014 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 26461413
• 研究機関: 独立行政法人国立病院機構(名古屋医療センター臨床研究センター)
• 研究代表者: 國島 伸治 独立行政法人国立病院機構(名古屋医療センター臨床研究センター), 高度診断研究部, 室長 (60373495)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2017-03-31
• キーワード: 巨核球 / 血小板 / 先天性血小板減少症 / 微小管 / チューブリン

研究実績の概要

先天性巨大血小板症の系統的解析において同定した血小板β1チューブリンの異常局在の原因を解析した。正常血小板ではβ1チューブリンはαチューブリンとヘテロ二量体を形成し、環状の微小管として正常な円盤状血小板形態にはたらく。患者血小板ではβ1チューブリンは解れた縄状構造をとり、αチューブリン発現は極めて低下していた。患者のβ1チューブリン遺伝子解析により、αチューブリンとの会合面にあたるヘテロ接合性のミスセンス変異(p.F260S)を同定した。CHO細胞を用いた強制発現実験では、変異型β1チューブリンは内因性αチューブリンと微小管を形成することなく凝集した。変異型β1チューブリンを発現させたマウス胎児肝臓細胞由来巨核球には正常巨核球に起こる胞体突起形成を介した血小板産生は観察されず、細胞質の分断／破裂による大型血小板の産生が観察され、放出された血小板のβ1チューブリンは患者血小板と同一の異常局在様式を呈した。

現在までの達成度 (区分)

1: 当初の計画以上に進展している

理由

研究準備が充分であったため、効率的に研究が進んだ。

今後の研究の推進方策

先天性巨大血小板症の系統的解析において、免疫蛍光染色による血小板β1チューブリン局在解析を引き続き施行する。

β1チューブリン発現による巨核球の増殖停止と血小板放出促進を明らかにするため、テトラサイクリン発現誘導細胞を作製し、微小管構成、細胞増殖、細胞形態に与える影響を解析する。

先天性巨大血小板症に関連するβ1チューブリン変異は犬および大型猫類においても報告されているため、既報ヒト変異に加え犬猫変異をCHO細胞での発現実験に供する。病的変異と考えられる結果が得られた場合には次年度に予定する培養巨核球実験に供する。

次年度使用額が生じた理由

ほぼ計画通りに使用した。

次年度使用額の使用計画

適正に使用予定である。

研究成果

• [雑誌論文] ACTN1-related thrombocytopenia: identification of novel families for phenotypic characterization (2015)
  • 著者名/発表者名: Bottega R, Marconi C, Faleschini M, Baj G, Cagioni C, Pecci A, Pippucci T, Ramenghi, U, Pardini S, Ngu L, Baronci C, Kunishima S, Balduini CL, Seri M, Savoia A, Noris P
  • 雑誌名: Blood 巻: 125 ページ: 869-872
  • DOI: 10.1182/blood-2014-08-594531
  • 査読あり
• [雑誌論文] The first two cases of MYH9 disorders in Thailand: an international collaborative study (2015)
  • 著者名/発表者名: Sirachainan N, Komwilaisak P, Kitamura K, Hongeng S, Sekine T, Kunishima S
  • 雑誌名: Ann Hematol 巻: 94 ページ: 707-709
  • DOI: 10.1007/s00277-014-2234-6
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Somatic mosaicism in MYH9 disorders: the need to carefully evaluate apparently healthy parents (2014)
  • 著者名/発表者名: Kunishima S, Kitamura K, Matsumoto T, Sekine T, Saito H
  • 雑誌名: Br J Haematol 巻: 165 ページ: 885-887
  • DOI: 10.1111/bjh.12797
  • 査読あり
• [雑誌論文] Platelet diameters in inherited thrombocytopenias: Analysis of 376 patients with all known disorders (2014)
  • 著者名/発表者名: Noris P, Biino G, Pecci A, Civaschi E, Savoia A, Seri M, Melazzini F, Loffredo G, Russo G, Bozzi V, Notarangelo LD, Gresele P, Heller P, Pujol-Moix N, Kunishima S, Cattaneo M, Bussel J, De Candia E, Cagioni C, Ramenghi U, Cagioni C, Fabris F, Balduini CL
  • 雑誌名: Blood 巻: 124 ページ: e4-e10
  • DOI: 10.1182/blood-2014-03-564328
  • 査読あり
• [雑誌論文] Spectrum of the mutations in Bernard-Soulier syndrome (2014)
  • 著者名/発表者名: Savoia A, Kunishima S, et al
  • 雑誌名: Hum Mut 巻: 35 ページ: 1033-1045
  • DOI: 10.1002/humu.22607
  • 査読あり
• [学会発表] Genetic basis of congenital macrothrombocytopenia (2015)
  • 著者名/発表者名: Shinji Kunishima
  • 学会等名: International Society on Thrombosis and Haemostasis Academy
  • 発表場所: Webinar
  • 年月日: 2015-03-25 – 2015-03-25
  • 招待講演
• [学会発表] Differential diagnosis of congenital macrothrombocytopenia (2014)
  • 著者名/発表者名: Shinji Kunishima
  • 学会等名: 8th Congress of the Asian-Pacific Society of Thrombosis and Hemostasis
  • 発表場所: Hanoi
  • 年月日: 2014-10-09 – 2014-10-11
  • 招待講演
• [学会発表] 幹細胞技術の検査医学研究への応用 (2014)
  • 著者名/発表者名: 國島伸治
  • 学会等名: 第33回日本臨床検査医学会東海北陸支部例会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2014-08-02 – 2014-08-02
  • 招待講演
• [学会発表] MYH9異常症の体細胞モザイク (2014)
  • 著者名/発表者名: 國島伸治 北村勝誠 松本多絵 関根孝司
  • 学会等名: 第15回日本検査血液学会学術集会
  • 発表場所: 仙台
  • 年月日: 2014-07-20 – 2014-07-21
• [学会発表] Molecular mechanisms for congenital macrothrombocytopenia (2014)
  • 著者名/発表者名: 國島伸治
  • 学会等名: 第36回日本血栓止血学会学術集会
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 2014-05-29 – 2014-05-31
  • 招待講演
• [学会発表] 巨核球特異的β1-tubulin異常は微小管構成阻害により胞体突起形成不全を来す (2014)
  • 著者名/発表者名: 國島伸治 北村勝誠 西村智 鈴木英紀 今泉益栄 齋藤英彦
  • 学会等名: 第36回日本血栓止血学会学術集会
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 2014-05-29 – 2014-05-31
• [図書] Annual Review 2015 血液 (2015)
  • 著者名/発表者名: 兼松 毅 國島伸治
  • 総ページ数: 240 (211-217)
  • 出版者: 中外医学社
• [図書] 血栓・止血異常の診療 (2014)
  • 著者名/発表者名: 國島伸治
  • 総ページ数: 297 (186-191)
  • 出版者: 中山書店
• [備考] 名古屋医療センター臨床研究センター
  • URL: http://www.nnh.go.jp/crc/