研究課題
本申請研究では、BCL-3による濾胞ヘルパーT細胞（Tfh細胞）分化誘導機構の分子メカニズムとCD4陽性T細胞内BCL-3の関節リウマチ(RA)の病態における役割を明らかにし、BCL-3、或はその標的分子をターゲットとしたRAの新規治療法開発に向けた基盤を確立することを目的としている。本年度はTfh細胞の分化、及び機能発現におけるBCL-3の役割について解析した。BCL-3のCD4陽性T細胞分化における役割を明らかにするために、卵白アルブミン(OVA)特異的なT細胞レセプターを発現するDO11.10マウス由来のナイーブCD4陽性T細胞を単離し、レトロウイルスを用いてBCL-3を遺伝子導入し、感染細胞を野生型マウスに移植し、OVAを免疫して、BCL-3を発現しているCD4陽性T細胞が、どのようなヘルパーT細胞サブセットに分化したかについて、フローサイトメトリーを用いて解析したところ、BCL-3を導入した細胞はコントロールの細胞に比して有意に多数のTfh細胞に分化していることが明らかとなった。このことより当初の予想通り、BCL-3はTfh細胞分化に対して促進的に機能していることが明らかとなった。次にBCL-3によるTfh細胞分化の分子メカニズムを明らかにするため、マウスナイーブCD4陽性T細胞にBCL-3をレトロウイルスを用いて遺伝子導入し、RNAシークエンシング法によりトランスクリプトーム解析を行ったところ、Tfh細胞分化においてマスター遺伝子と考えられているBCL-6の発現が誘導されていることを見いだした。
2: おおむね順調に進展している
本年度はin vivoの実験系により、BCL-3がTfh細胞分化において促進的な役割をしていることを明らかにし、さらにレトロウイルスを用いたBCL-3遺伝子導入細胞におけるトランスクリプトーム解析から、BCL-3がTfh細胞分化においてマスター遺伝子と考えられているBCL-6の発現を誘導している可能性まで言及することができた。当初の研究計画では、本年度、Tfh細胞の分化、及び機能発現におけるBCL-3の役割を解明することまでを目標にしていたため、本年度得た上記研究成果は、研究の目的の達成度としてはおおむね順調に進展していると考えている。
これまで、in vivoの実験系により、BCL-3がTfh細胞分化において促進的な役割をしていること、さらにレトロウイルスを用いたBCL-3遺伝子導入細胞におけるトランスクリプトーム解析から、BCL-3がTfh細胞分化においてマスター遺伝子と考えられているBCL-6の発現を誘導している可能性についてまで言及することができている。今後は、BCL-3によるBCL-6の発現誘導の分子メカニズムを明らかにするため、１）BCL-3によるBCL-6プロモーターの活性化について、２）BCL-3のBCL-6プロモーター部位への結合について、明らかにしていく予定である。さらにCD4陽性T細胞内BCL-3の関節リウマチ発症への影響について、T細胞特異的BCL-3欠損マウスを用いてコラーゲン誘導性関節炎を解析することにより明らかにしていく予定である。
当初予定していたRNAシークエンシングによるトランスクリプトーム解析のための検体準備が若干遅延したため一部の物品費が来年度に繰り越しとなった。
物品費として使用する。
すべて 2014
すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件、 謝辞記載あり 2件) 学会発表 (2件)
Nat Commun.
巻: 5 ページ: 4177
10.1038/ncomms5177
J Exp Med.
巻: 211 ページ: 1857-74
10.1084/jem.20130791
