日本人小児1型糖尿病におけるmicroRNA多型解析

2016 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 26461553
• 研究機関: 日本大学
• 研究代表者: 浦上 達彦 日本大学, 医学部, 准教授 (60223616)
• 研究分担者: 鈴木 潤一 日本大学, 医学部, 助教 (00573825)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: micro RNA多型 / 1型糖尿病 / 膵島関連自己抗体 / インスリン分泌能

研究実績の概要

本研究は、小児1型糖尿病児におけるmicro RNA多型の有無およびその機能を明らかにし、発症予防法の確立、疾患発症機序の発見や疾患重症化因子の解明、治療法の開発などを通して本症を有する患者および家族の診療に寄与するとともに、成育医療研究の進展に貢献することを目的としている。
小児1型糖尿病児約700例から、発症時におけるインスリン抗体、GAD抗体、IA-2抗体の膵島関連自己抗体いずれかが陽性かつ、インスリン分泌能低下が確認できた症例187例を対象として抽出した。これらの対象者の保存DNAサンプルを用い、候補micro RNAをターゲットとしたアンプリコンシークエンス（イルミナ社　TruSeq Custom Amplicon Project）を次世代シークエンサー（イルミナ社　Miseq）にて行った。現在、187例の解析をそれぞれ2回施行し、いずれの例においてもDNAからのアンプリコンシークエンスの際に形成するクラスターが不十分もしくは過剰形成となり、シークエンサーでの解析判別が不可能であった。候補miRNAをターゲットとしたアンプリコンシークエンスでは同サンプルで再度解析は困難であり、microRNA多型による疾患発症の機序を解明することが困難である一方で、徐々にそのターゲットが明らかになってきているmicroRNAの生体内での発現量を明らかにすることにより発症機序の解明につながると考え、新規発症小児1型糖尿病における血清microRNAの発現解析を進めている。現在、26名の新規発症小児1型糖尿病の血清microRNAの解析進行中で、解析結果について学会、論文等で報告する予定である。また、ZnT8抗体をはじめとする膵島関連自己抗体の抗体価や1型糖尿病の発症様式、残存するインスリン分泌能などの臨床的な特徴と候補microRNA発現量との関連について解析を行う予定としている。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

小児1型糖尿病患児約700例から、発症時におけるインスリン抗体、GAD抗体、IA-2抗体の膵島関連自己抗体のいずれかが陽性かつ、インスリン分泌能の低下～枯渇が確認できた症例187例の対象者の保存DNAサンプルを用い、候補micro RNAをターゲットとしたアンプリコンシークエンス（イルミナ社　TruSeq Custom Amplicon Project）を次世代シークエンサー（イルミナ社　Miseq）にて行った。現在、187例の解析をそれぞれ2回施行したが、いずれの例においてもDNAからのアンプリコンシークエンスの際に形成するクラスターが不十分もしくは過剰形成となり、シークエンサーでの解析判別が不可能となった。したがって以上の研究を再度行ったため、研究進行の遅れが生じている。

今後の研究の推進方策

候補miRNAをターゲットとしたアンプリコンシークエンスでは同サンプルで再度解析は困難であり、microRNA多型による疾患発症の機序を解明することが困難である一方で、徐々にそのターゲットが明らかになってきているmicroRNAの生体内での発現量を明らかにすることにより発症機序の解明につながると考え、新規発症小児1型糖尿病における血清microRNAの発現解析を進めている。現在、26名の新規発症小児1型糖尿病の血清microRNAの解析進行中で、解析結果について学会、論文等で報告する予定である。また、ZnT8抗体をはじめとする膵島関連自己抗体の抗体価や1型糖尿病の発症様式、残存するインスリン分泌能などの臨床的な特徴と候補microRNA発現量との関連について解析を行う予定としている。

次年度使用額が生じた理由

新規発症小児1型糖尿病の血清microRNAの解析進行中であるが、解析が現在うまく進行していない。一方症例の病態として、膵島特異的自己免疫を証明するうえで、液性免疫機序として、膵島関連自己抗体を測定する必要がある。

次年度使用額の使用計画

今までの実験で解析不能であった血清microRNAの解析を再施行する予定である。また、膵島関連自己抗体としてGAD抗体、IA-2抗体の他、新しい自己抗体として注目されているZnT8抗体抗体価の測定を行う予定である。更に残存インスリン分泌能の評価として各種内分泌検査を実施する予定である。

研究成果

• [雑誌論文] A randomized crossover study of the efficacy and safety from insulin glargine to insulin degludec in children with type 1 diabetes. (2017)
  • 著者名/発表者名: Urakami T, Mine Y, Aoki M, Okuno M, Suzuki J
  • 雑誌名: Endocrine J 巻: 64 ページ: 133-140
  • DOI: 10.1507/endocrJ.EJ16-0294
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Ｅｄucation activities inmrove detection of growrh abnormalities in young children. (2016)
  • 著者名/発表者名: Urakami T, Nishimura K, Nishimura Y, Takahashi S
  • 雑誌名: Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ 巻: 58 ページ: 1255-1256
  • DOI: 10.1111/ped.1310
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Identification of monogenic gene mutations in Japanese subjects diagnosed with type 1B diabetes between >5 and 15.1 years of age. (2016)
  • 著者名/発表者名: Moritani M, Yokota I, Horikawa R, Urakami T, Nishii A, Kawamura T, Kikuchi N, Kikuchi T, Ogata T, Sugihara S
  • 雑誌名: J Pediatr Endocrinol Metab 巻: 29 ページ: 1047-1054
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] Clinical characteristics in schoolchildren with renal glucosuria detected by urine glucose screening program at schools in Tokyo metropolitan area during 2000-2015. (2016)
  • 著者名/発表者名: Urakami T, Mine Y, Aoki M, Okuno M, Suzuki J.
  • 学会等名: 50th Annual meeting for the Japanese Society for Pediatric Endocrinology/9th Biannual meeting for Asia Pacific Pediatric Endocrine Societｙ
  • 発表場所: Tokyo, Japan
  • 年月日: 2016-11-05 – 2016-11-06
  • 国際学会