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小児PAH(73例)を対象に、BMPR2、ALK1、SMAD遺伝子の異常の有無を直接シークエンス法及びMLPA法で解析した。直接シークエンス法で検出できていなかったBMPR2の遺伝子変異が2家系で確認できた。smad8の変異は患者数を増やしたが、やはり1例でしか検出できなかった。したがって、われわれが以前報告したIPAHにおけるsmad8変異の頻度はBMPR2やALK1と比較すると非常に低いものと考えられた。さらに、われわれはsmad遺伝子について1から5まで解析の幅を広げたものの、これまでに変異を検出できなかった。
そこで、BMP/TGF-βシグナル伝達の中で、いまだ未検討のHIVEP1について変異を検討すべくそのプライマーを作成し、直接シークエンス法で、全症例に対して解析を開始した。その結果2人の患者において、HIVEPの変異を確認することができた。 HIVEP1 Exon9 c.7089 G>T Gln 2363 HisとHIVEP1 Exon5 c.6107 T>C Val 2036 Alaの2種類の変異が検出された。さらにこの変異の病原性を確認するため、蛋白質レベルでの機能解析を行った。以前smad８の機能解析を行ったときと同様の方法で、ウェスタンブロット法によりMyc-Smad8リン酸化をwild typeと比較した。また、ルシフェラーゼアッセイで転写活性の比較を行った。しかし、いずれも有意な差は認めることはできなかった。したがって、今回の研究では、検出された変異の病原性を蛋白質レベルで証明することはできなかった。
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