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2015 年度 実施状況報告書

線維芽細胞、間葉系幹細胞を用いた真皮再構築による表皮水疱症の新規治療戦略

研究課題

研究課題/領域番号 26461675
研究機関弘前大学

研究代表者

松崎 康司  弘前大学, 医学部附属病院, 講師 (50322946)

研究分担者 澤村 大輔  弘前大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (60196334)
研究期間 (年度) 2014-04-01 – 2017-03-31
キーワード表皮水疱症 / 間葉系幹細胞
研究実績の概要

栄養障害型表皮水疱症は、VII型コラーゲンがないため一生涯水疱が生じる遺伝性疾患である。本研究の目的は、患者由来の細胞を使い外力に強い人工的な真皮・脂肪組織を再構築する新規治療法を確立することである。頭皮など有毛部位が重症化しないのは、表皮下に存在する豊富な細胞外マトリックスと脂肪組織が外力分散に重要な役割を果たしているからである。有毛部位に豊富にある毛包周囲線維芽細胞、多分化能を有しアディポカイン・サイトカインを産生する脂肪組織由来間葉系幹細胞を用いた真皮―脂肪組織の再構築は、手足の水疱形成を抑制し瘢痕の予防になると考える。患者本人の細胞であり、拒絶反応もなく安全に行える治療である。
現時点での研究成果は下記の通りである。
Ⅰ.脂肪組織由来間葉系幹細胞の採取、機能解析
① C57BL/6マウス鼠径より脂肪を採取、コラゲナーゼ処理後細胞を回収、培養した。② FCM・ソーティングでCD31、CD45陰性、CD90、CD105、Sca1陽性の細胞を回収、脂肪組織由来間葉系幹細胞として培養した。③ 脂肪細胞誘導培地に切り替え、脂肪細胞への分化能があるか確認した。④ 培養中の培養液を用い、サイトカイン・アディポカイン産生をELISA解析した。
Ⅱ.VII型コラーゲンKOマウス皮膚の移植
① 生後1日のGFP(+)VII型コラーゲンKOマウス背部皮膚を免疫不全マウス背部に移植。② 植皮片下に毛包周囲線維芽細胞、脂肪組織由来間葉系幹細胞をそれぞれ1×106個投与。③ 植皮後のGFP(+)皮膚の形状を、in vivo imagingシステムを用い経時的に観察。④ 組織学的に真皮・脂肪組織の再構築について比較検討。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

① C57BL/6マウスの髭、体毛から、実体顕微鏡を用い結合組織性毛包を分離、培養した。② 筋線維芽細胞で発現がみられるα-SMA、ビメンチンの発現、血管増生に関わるVEGFの発現をRT-PCR、ウエスタンブロット、ELISAで定量的に確認した。③ C57BL/6マウス鼠径より脂肪を採取、コラゲナーゼ処理後細胞を回収、培養、FCM・ソーティングでCD31、CD45陰性、CD90、CD105、Sca1陽性の細胞を回収できた。④ 脂肪細胞誘導培地に切り替え、脂肪細胞への分化能があるか確認した。⑤ 培養中の培養液を用い、サイトカイン・アディポカイン産生をELISA解析している。

今後の研究の推進方策

表皮水疱症発症マウスの真皮・皮下組織再構築
申請者らは、すでにタモキシフェン誘導性のコンディショナルVII型コラーゲンKOマウスを作成し所有している。成人発症させた表皮水疱症をそのマウス由来、つまり正常なVII型コラーゲンを発現できない自分自身の細胞を使い、外力耐性な真皮・皮下組織を再構築できるかを調べる。

  • 研究成果

    (9件)

すべて 2016 2015

すべて 雑誌論文 (5件) (うち査読あり 5件、 オープンアクセス 5件、 謝辞記載あり 1件) 学会発表 (4件)

  • [雑誌論文] Immunosuppressive effect of adipose-derived stromal cells on imiquimod-induced.2016

    • 著者名/発表者名
      Rokunohe A, Matsuzaki Y, Rokunohe D, Sakuraba Y, Fukui T, Nakano H, Sawamura D.
    • 雑誌名

      J Dermatol Sci

      巻: 82 ページ: 50-53

    • DOI

      10.1016/j.jdermsci.2015.12.007

    • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] Modified sympathetic nerve regulation in AKAP5-null mice.2016

    • 著者名/発表者名
      Han C, Tomita H, Ohba T, Nishizaki K, Ogata Y, Matsuzaki Y, Sawamura D, Yanagisawa T, Osanai T, Imaizumi T, Matsubara A, Adachi T, Ono K, Okumura K, Murakami M.
    • 雑誌名

      Biochem Biophys Res Commun

      巻: 469 ページ: 897-902

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2015.12.057.

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Superficial epidermolytic ichthyosis caused by a novel KRT2 mutation.2015

    • 著者名/発表者名
      Akasaka E, Minakawa S, Rokunohe D, Toyomaki Y, Matsuzaki Y, Sawamura D, Nakano H.
    • 雑誌名

      J Dermatol Sci

      巻: 79 ページ: 86-88

    • DOI

      10.1016/j.jdermsci.2015.04.006

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Involvement of the histamine H1 receptor in the regulation of sympathetic nerve activity.2015

    • 著者名/発表者名
      Murakami M, Yoshikawa T, Nakamura T, Ohba T, Matsuzaki Y, Sawamura D, Kuwasako K, Yanagisawa T, Ono K, Nakaji S, Yanai K.
    • 雑誌名

      Biochem Biophys Res Commun

      巻: 458 ページ: 584-589

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2015.02.009.

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Oral lichen planus with antibodies to desmogleins 1 and 3.2015

    • 著者名/発表者名
      Kinjyo C, Kaneko T, Korekawa A, Rokunohe A, Aizu T, Matsuzaki Y, Nakano H, Sawamura D.
    • 雑誌名

      J Dermatol

      巻: 42 ページ: 40-41

    • DOI

      10.1111/1346-8138. 12661.

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [学会発表] アトピー性皮膚炎(AD)と好酸球性胃腸炎患者におけるフィラグリン遺伝子(FLG)変異の検討2016

    • 著者名/発表者名
      皆川智子、金子高英、松﨑康司、中野 創、澤村大輔、平賀寛人、櫻庭裕丈、河野通浩、秋山真志
    • 学会等名
      第79回日本皮膚科学会東京・東部支部合同学術大会
    • 発表場所
      京王プラザホテル(東京都新宿区)
    • 年月日
      2016-02-20 – 2016-02-21
  • [学会発表] Richner-Hanhart症候群(高チロシン血症Ⅱ型)の1例2016

    • 著者名/発表者名
      赤坂英二郎、滝吉典子、松﨑康司、櫻庭裕佑、是川あゆ美、会津隆幸、豊巻由香、中野 創、澤村大輔
    • 学会等名
      日本皮膚科学会岩手地方会第373回例会
    • 発表場所
      マリオス(岩手県盛岡市)
    • 年月日
      2016-02-06 – 2016-02-07
  • [学会発表] 当科における乾癬治療の現状とご紹介頂いた患者の治療経過2015

    • 著者名/発表者名
      松﨑康司
    • 学会等名
      第122回弘前皮膚科専門医会
    • 発表場所
      ホテルニューキャッスル(青森県弘前市)
    • 年月日
      2015-11-25 – 2015-11-25
  • [学会発表] 新規ケラチン2遺伝子変異により生じた表在性表皮融解性魚鱗癬2015

    • 著者名/発表者名
      赤坂英二郎、中野 創、皆川智子、六戸大樹、豊巻由香、松﨑康司、澤村大輔
    • 学会等名
      第30回角化症研究会
    • 発表場所
      経団連会館(東京都千代田区)
    • 年月日
      2015-08-01 – 2015-08-01

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公開日: 2017-01-06  

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