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2017 年度 実績報告書

γ-セクレターゼ非依存的なβAPP膜内切断機構の解析

研究課題

研究課題/領域番号 26461745
研究機関大阪大学

研究代表者

柳田 寛太  大阪大学, 医学系研究科, 特任研究員(常勤) (70467596)

研究分担者 田上 真次  大阪大学, 医学系研究科, 助教 (40362735)
大河内 正康  大阪大学, 医学系研究科, 講師 (90335357)
研究期間 (年度) 2014-04-01 – 2018-03-31
キーワードアルツハイマー病 / γ-セクレターゼ / CRISPR/CAS9
研究実績の概要

γ-セクレターゼ非依存的なβAPPの膜内切断メカニズムを解析するため、Aβ産生を増加させる家族性アルツハイマー病変異体(スウェーデン変異)のβAPPを発現させたHEK細胞(swAPP/HEK)を作製し、γ-セクレターゼ複合体の主要構成タンパクであるプレセニリン1及びプレセニリン2をCRISPR/CAS9法を用いてノックアウトした(swAPP/PSDKO HEK細胞)。この細胞にオートファジー/リソソーム酵素阻害剤であるクロロキンを作用させると、γ-セクレターゼの基質となるα-またはβ-セクレターゼでβAPPが切断されたC末端断片(α-CTF、β-CTF)が1.3倍増加していた。しかしリソソーム酵素を阻害しないオートファジー阻害剤(Wortmannin)ではCTFの量は変化しなかった。この結果から、CTFの分解には非オートファジーのリソソーム分解系が関与していることが示唆された。クロロキンによってswAPP/PSDKO HEK細胞のCTFの膜内切断が阻害されているかを調べるため、細胞内のオリゴペプチドを調製し、βAPPの膜貫通領域内の3-6アミノ酸のペプチドをLC-Ms/Msで定量した。その結果、βAPPの膜貫通領域由来と考えられる3アミノ酸のペプチド8種類が減少していた。しかし、カテプシンB、H、L、Sを阻害するLeupeptinやカテプシンDを阻害するPepstatin Aでは変化は見られなかった。この事からβAPPの膜貫通領域はリソソームに存在するTripeptidyl peptidase Iの様なペプチドを3アミノ酸ずつ切断するペプチダーゼによって分解されることが示唆された。

  • 研究成果

    (1件)

すべて 2017

すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件、 オープンアクセス 1件)

  • [雑誌論文] Semagacestat Is a Pseudo-Inhibitor of γ-Secretase2017

    • 著者名/発表者名
      Tagami Shinji、Yanagida Kanta、Kodama Takashi S.、Takami Mako、Mizuta Naoki、Oyama Hiroshi、Nishitomi Kouhei、Chiu Yu-wen、Okamoto Toru、Ikeuchi Takeshi、Sakaguchi Gaku、Kudo Takashi、Matsuura Yoshiharu、Fukumori Akio、Takeda Masatoshi、Ihara Yasuo、Okochi Masayasu
    • 雑誌名

      Cell Reports

      巻: 21 ページ: 259~273

    • DOI

      10.1016/j.celrep.2017.09.032

    • 査読あり / オープンアクセス

URL: 

公開日: 2018-12-17  

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